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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】ITS测序
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xclj369ouc

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】ITS测序 已有13人参与

请教大家谁有测过ITS序列？
是直接PCR产物测序的，还是克隆测序的啊？
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1楼 2010-05-09 12:11:09
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南海所老龚

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主你好，我是做鱼类ITS的，我的情况是扩增出来的ITS序列不是单单一条序列，而是有多条序列，所以不能直接测序，而是需要单克隆再测序。而在真菌或者植物里面，这样的情况比较少见。不知道楼主是哪方面研究。欢迎多交流。
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TheBestandMostBeautifulThingsintheWorldCan'tBeSeenorTouched,TheyMustBeFeltwithHeart.
16楼2013-12-15 23:16:01
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):招版主！ 2010-05-09 13:34:26
我PCR产物不纯化就送去测序，测过超过20条序列。不过最好不要有干扰测序公司纯化的杂带，量也要达到他们的要求。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2010-05-09 13:17:17
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nklyw

木虫 (正式写手)
两者都行吧  不过送测之前要纯化的
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3楼2010-05-09 13:23:57
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long5lizi

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-05-09 17:33:28
我们一般是PCR以后再去测序的。
    无论是哪种方法得到的序列，在自动测序仪上都具有测序引物与模板的识别、结合过程，使得靠近引物端的碱基测序信号弱，不易读出。对于克隆测序，读不出的是部分载体序列，而直接测序读不出的是ITS片段的部分序列，所以前者所得序列的更符合ITS全长。
    但直接测序要快速方便，而克隆测序费时费力
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4楼2010-05-09 14:41:41
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