24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1717  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

humants

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】【求助】有没有做过pfu和rTaq一起使用的 已有14人参与

最近在做PCR,目的基因大小为1kb。用rTaq扩增效果很好,但是发生突变,我最终的产物是用来表达,测定生物活性的所以要求没有突变。后来就买了promega的pfu但是不论怎么探索就是P不出来,500多元买的东西,眼见就没了,兄弟我急啊。所以打算退而求其次,将pfu和rTaq混合起来用,但是不知道以下内容:
1:二者的配比是多少?
2:两个混合到一起,用谁的buffer?
3:退火温度是迁就rTaq还是pfu?


谢谢大家~~~
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主


humants(金币+1):谢谢参与
我们用鼎国的taq plus 据说是两种酶的混合酶。。。
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
12楼2010-06-13 16:37:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

lingn

木虫 (正式写手)


humants(金币+1):谢谢参与
1:1混就好,用PFU的buffer,退火温度有区别吗?
2楼2010-05-06 16:32:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)


humants(金币+1):谢谢参与
呵呵,1/16或者20%都可以的,退不需要调整什么,就是延伸最好按照pfu的设置
3楼2010-05-06 16:38:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝粉笔

铁虫 (初入文坛)

★ ★
humants(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+1):鼓励新虫!欢迎多来交流!:tiger06: 2010-05-06 22:52:21
那种酶保真效果更好呢?我也在纠结这个问题,一个碱基错了就得重来了,很郁闷。或者有什么方法可以提高酶的保真性呢?是优化Mg还是dNTP或是温度?
4楼2010-05-06 16:46:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 26年申博自荐-计算机视觉 20+3 光亮我自己 2026-05-01 4/200 2026-05-03 09:01 by lfy8008
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-03 07:22 by jmr1kibhvw
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qs8kylt1wr 2026-05-01 4/200 2026-05-03 07:19 by jmr1kibhvw
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 05:49 by w5idbsc3mz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 05:04 by jmr1kibhvw
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 04:34 by w5idbsc3mz
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 04:19 by w5idbsc3mz
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 03:49 by w5idbsc3mz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-03 03:19 by w5idbsc3mz
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-03 02:06 by w5idbsc3mz
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 k17zww5nna 2026-05-01 5/250 2026-05-03 01:49 by w5idbsc3mz
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qs8kylt1wr 2026-05-01 4/200 2026-05-03 00:00 by 火炎焱燚炙烤
[考博] 考博 +4 Eternitf 2026-04-29 4/200 2026-05-02 16:10 by yejenny
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 3/150 2026-05-02 14:06 by zahslv263y
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 3/150 2026-05-02 09:36 by dz7y1p1i98
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 5/250 2026-05-02 09:21 by dz7y1p1i98
[考博] 药化及相关博士的申请 5+3 中药学渣 2026-04-29 3/150 2026-05-01 18:14 by babero
[论文投稿] 一篇MDPI论文改变了学习工作和生活 +3 helsinglee 2026-04-29 4/200 2026-05-01 11:45 by bobvan
[基金申请] 收到国自然专家邀请后几年才会有本子送过来评 +3 barley5 2026-04-30 3/150 2026-04-30 14:58 by aspect3000
[论文投稿] 有没有快的中文核心比较快录用的,纳米材料光催化 5+3 2914439618 2026-04-27 4/200 2026-04-29 08:59 by 北京莱茵润色
信息提示
请填处理意见