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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】SP柱子纯化蛋白，蛋白结合后，用2M NacL都没有洗脱下来，该怎么办？
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1118

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】SP柱子纯化蛋白，蛋白结合后，用2M NacL都没有洗脱下来，该怎么办？ 已有4人参与

>有一蛋白蛋白等电点6.8,一开始在PH=4.0的溶液中，现在遇到一个问题，用B相（100%），NaCL的浓度都达到2 M了，洗脱下一部分蛋白，但是从上样的蛋白量来看，蛋白都已经挂柱子了，穿透里面没有蛋白，但是洗脱下来的蛋白蛮少，断定很多蛋白还是挂在柱子上的，现在要用什么方法把其余的蛋白洗脱下来呢？
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1楼 2010-04-28 19:06:38
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月月大可

木虫 (著名写手)
★
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-04-29 15:38
结合力太强了，不要用SP这种强阳离子交换柱了，换成弱的试试看。比如CM

要不就提高一些你上样Buffer的pH试试。
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2楼2010-04-29 12:25:56
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1118

木虫 (小有名气)
现在用8M尿素洗脱，蛋白也没洗脱下来，用4.5 M的盐酸胍洗脱，出现一个峰，虽然峰高还可以，但是电泳分析发现没有目的蛋白，那目的蛋白跑那里去了？
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3楼2010-05-04 09:54:25
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1118

木虫 (小有名气)
大家踊跃发言哈
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4楼2010-05-04 09:54:42
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金奇橙

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-05-04 12:28
SP柱结合力太强，大部分结合到柱上，是洗不下来的，一般我们都不太爱用，都用弱的CM柱或别的，用NAOH或HCL应该能洗下来，但有活性要求的就算洗下来也没用了
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5楼2010-05-04 11:18:21
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calorimetry

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
SP是一种强阳离子交换柱，你上样时 用的缓冲溶液的pH是肯定小于目的蛋白质的pI值的，以便让你的目的蛋白质带上正电荷，也就能够挂在强阳离子交换柱的磺丙基基团上了。用提高离子强度，无法解离目的蛋白质与SP的非共价相互作用，那么我们为什么不能用pH大目的蛋白质的pI值的缓冲溶液去洗脱哪。这是可以配合2M氯化钠溶液同时洗脱，这是至少一部分挂柱的目的蛋白质的电荷会在pH大目的蛋白质的pI值的缓冲溶液的环境中变为负电荷而从阳离子层析柱上掉下来。
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6楼2015-06-18 14:25:38
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