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【求助/交流】请教native page的相关知识 已有3人参与
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想做一下native page ，但是对于其中的一些诀窍，还不是很清楚，所以想请教各位大侠，能否给小弟上一课，小弟在此先谢了！哈哈！ 对于其中涉及到的一些试剂，小弟已经有所了解了，不太明白的主要集中于如何做胶，如何处理样品及maker，还有电泳过程中的一些参数设置及注意点，小弟在此先谢了 |
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小弟也确实看了很多资料，也请教了一位曾今做过native page的师姐，紧随其后我也做了一次实验，但是实验以失败告终，那我就说一下，试验中的情况和结果中出现的情况： 1、事先，小弟也进行了预电泳，时间为半小时，不知道是不是短了一些； 2、电泳过程中，我不能很确定其是否为较低的温度下进行的，因为，我只是将电泳槽整体放在冰上； 3、试验中，由于不知道如何处理样品，只是将样品和上样缓冲液混合了一下，不知道有没有影响（marker事先我煮了几分钟）； 4、上样时发现，样品并未像marker一样，成股流下，而是分叉的多股流下，不知道有没有影响（甘油浓度绝对没问题）； 5上样时，我加了两个不同的marker，以判断其大小，但是很奇怪的是，两个marker都有很严重的拖尾现象（对于marker，之前和之后的人用了都没有问题） 看了上面的情况，不知道大侠有什么看法，和对我试验的一些建议！ 小弟在此感激不尽！ [ Last edited by marc0907 on 2010-4-24 at 22:53 ] |
4楼2010-04-24 22:48:51
zjzz
木虫 (正式写手)
在通往变态的坦途上
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2109.3
- 帖子: 793
- 在线: 22.2小时
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- 专业: 微生物/分子生物学
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marc0907(金币+2): 2010-04-24 22:32
scelab(金币+8):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-25 21:15
marc0907(金币+2): 2010-04-24 22:32
scelab(金币+8):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-25 21:15
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做胶得先明白的要跑的样品的酸碱性，如果是蛋白一般可以预测一下等电点。 等明确了酸碱后就考虑你的胶浓度，写好配方 然后就可以配胶了，操作跟非变性胶差不多。但是胶板之类的不要跟变性胶的混用了。 非变性胶可以多加点temed，多凝一些时间。 非变性胶一般用前需要预电泳，我一般100V，1h。 电泳我一般4度冷库10mA稳流，有时候也用100V稳压 酸性样品电泳跟变性的差不多 碱性的需要电极倒置 样品只要不是离子浓度太高，没什么大问题 其实你一用搜索，讲native胶的原理制作注意事项常见问答的有一堆 我虽然做过这个，但确实不是高手，不能教你什么技术 我想跟你说的，是学习的方法，在希望别人能给自己上一课的时候， 自己先预习一下，网上那么多资料，你看的多了自然心中有数。再有针对性的提出不懂的问题，也让后面的高手老师们心里有个底 网上不缺乏热心的高手，但是高手的时间也是时间，你搜索可以解决的问题为什么非得让他们再给你打一遍或复制一遍？ 看你其实还是看了点资料的，那么你提问的时候能不能问的稍微具体点呢？那么多样品你是希望得到标准回答各种样品如何处理？其实问题问的越详细解决的越简单。 特殊时期内分泌不稳中，乱说一堆，见谅 其实只是我的沙发控发作了 [ Last edited by zjzz on 2010-4-24 at 20:02 ] |
2楼2010-04-24 19:52:12
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小弟也确实看了很多资料，也请教了一位曾今做个native page的师姐，紧随其后我也做了一次实验，但是实验以失败告终，那我就说一下，试验中的情况和结果中出现的情况：1、事先，小弟也进行了预电泳，时间为半小时，不知道是不是短了一些；2、电泳过程中，我不能很确定其是否为较低的情况下进行的，因为，我只是将电泳槽整体放在冰上；3、试验中，由于不知道如何处理样品，只是将样品和上样缓冲液混合了一下，不知道有没有影响（marker事先我煮了几分钟）；4、上样时发现，样品并未像marker一样，成股留流下，而是分叉的多股流下，不知道有没有影响（甘油浓度绝对没问题）；5上样时，我加了两个不同的marker，以判断其大小，但是很奇怪的是，两个marker都有很严重的拖尾现象（之前和之后的人用了都没有问题） 看了上面的情况，不知道大侠有什么看法，和对我试验的一些建议！ 小弟在此感激不尽！ |
3楼2010-04-24 22:47:52
5楼2010-04-25 12:18:09
