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weiminhb

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于菌落PCR已有7人参与

最近做转化,然后挑转化子,培养后做菌落PCR,总是假阳性,不能扩增出目标条带。想请教下,菌落PCR结果准吗?要不要将转化子接LB液体提质粒后再做PCR鉴定啊?
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hui_student

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+3):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-19 23:02
直接菌落PCR应该可以,LB固体平板,挑半个菌落行菌落PCR,等出结果且确定正确后在将剩余半个菌落扩增提质粒做后续实验比较好。直接扩菌提质粒,如果所选菌不正确的话,提质粒即费时又费试剂盒。
再有,您帖子里说的应该不是假阳性吧,假阳性是重组子未进入感受态细菌,但是扩曾出目的带,你现在没有出带,应该考虑是否是平板抗生素是否还有效,能否起到删选作用等。
希望有所帮助。
一路前行!
6楼2010-04-19 23:00:23
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