应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】real-time PCR cDNA模板问题
91/1返回列表
查看: 1202  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 gdongli8325 的 3 个金币

gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】real-time PCR cDNA模板问题 已有5人参与

看了不少资料，还是不明白做实时定量PCR时，起始的cDNA模板必须是一致的吗?我目前用的是从1ugRNA中得到的，直接用于实时定量，但用完了。我第一次做反转录时，不知道必须用等量的RNA，所以只是取了1ulRNA 反转录。现在用的cDNA用完了，不知道以前这种方式得到的cDNA是否将浓度调到一致后可以使用？多谢答复。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-04-07 04:07:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
★ ★ ★
1949stone(金币+3):说清楚了 2010-04-07 08:06
本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2010-04-07 04:34:02
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)
[quote]Originally posted by 彬心玉壶 at 2010-04-07 04:34:02:
1，提RNA
2，测浓度
3，反转成cDNA，这时候要根据你上一步测的浓度，在反转录中加入同样质量的RNA,一般为一个反应反转录250ng,或者500ng的RNA，
4，反转录完成后，稀释5倍或10倍，取2UL做模板做QRT-PCR，最好是 ... [/
我就是不明白加内标不就是为了均一化模板吗？为什么还需要使用等量的RNA 呢？
赞一下 回复此楼
3楼2010-04-07 04:46:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
gdongli8325(金币+1): 2010-04-07 13:52
不必，有你的内参呢
赞一下 回复此楼
4楼2010-04-07 08:24:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaozx123

金虫 (小有名气)
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-07 12:35
gdongli8325(金币+1): 2010-04-07 13:52
将RNA浓度定量到1ug进行反转录，这样得到的cDNA可以认为是均一的，其进行荧光定量PCR时扩增曲线好看，并且较易分析，内参当然是必须的了，所以很能说明问题。
这也只是我所了解到的，希望与大家共同交流。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-04-07 08:40:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
★ ★ ★ ★
scelab(金币+4):high hand~ :tiger23: 2010-04-08 18:31
本帖仅楼主可见
赞一下
6楼2010-04-08 15:29:34
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

匿名

用户注销 (著名写手)
★
scelab(金币+1):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-08 18:32
本帖仅楼主可见
赞一下
7楼2010-04-08 15:33:19
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

gaozx123

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-09 12:39
同意楼上，用反转录成的cDNA去定量其实是不准确的，可能我们用的是总RNA，所以只能定量RNA浓度之后再反转。
楼主所说的定量cDNA，我想应该是半定量吧，那样调出来的浓度是根据条带的灰度值调的，并不是准确定量。最好还是用RNA定量后反转。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-04-09 09:09:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘仕博

金虫 (著名写手)
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-10 11:47
LZ的问题没太看明白，不过我也一直在做这个。real time-PCR本身就是一个定量的反应，所以在cDNA转录的时候一定要定量，一般都是加1ug的RNA。然后在PCR的时候把模板适当稀释。当然内参也是必须的~
赞一下(1人) 回复此楼
生命在于折腾~
9楼2010-04-09 14:42:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gdongli8325 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 286求调剂 +10 Faune 2026-03-21 10/500 2026-03-21 23:34 by 314126402
[考研] 化学调剂 +5 yzysaa 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:12 by peike
[考研] 333求调剂 +5 87639 2026-03-21 7/350 2026-03-21 19:31 by ColorlessPI
[考研] 0805 316求调剂 +3 大雪深藏 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:55 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-16 3/150 2026-03-21 03:59 by JourneyLucky
[考研] 初始318分求调剂（有工作经验） +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 二本跨考郑大材料306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:29 by JourneyLucky
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕，总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:32 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕英一数二306 +7 z1z2z3879 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:48 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 广西大学家禽遗传育种课题组2026年硕士招生（接收计算机专业调剂） +3 123阿标 2026-03-17 3/150 2026-03-20 15:58 by 飞行琦
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考博] 申博26年 +3 八6八68 2026-03-19 3/150 2026-03-19 19:43 by nxgogo
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭