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【求助】LH-20葡聚糖凝胶该如何装柱子 已有15人参与
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| 刚买的100gLH-20葡聚糖凝胶，该如何装柱子？先要用甲醇泡吗？还是用水泡？泡到啥程度装柱子？要装多大的柱子？请高手指点 |
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zhaolu850813
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kangroo-no1
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3楼2010-03-26 21:08:06
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karl2100(金币+1):谢谢提供！ 2010-04-02 00:36
黑妞0132(金币+1):谢谢指导 2010-04-05 12:36
黑妞0132(金币+2):写的太棒了 2010-04-05 12:43
karl2100(金币+1):谢谢提供！ 2010-04-02 00:36
黑妞0132(金币+1):谢谢指导 2010-04-05 12:36
黑妞0132(金币+2):写的太棒了 2010-04-05 12:43
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1 Sephadex LH20是一种价钱较高的填料，使用请千万注意，很贵的哟！ （当然，老板有钱就另当别论拉） 2 先讲Sephadex LH20 的原理。 Sephadex LH20的分离原理主要有两方 面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。因为凝胶 过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留 强，最后出柱。如果使用反相溶剂洗脱， Sephadex LH20对化合物还起反相 分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保 留强，后出柱。如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。 3 再讲Sephadex LH20 洗脱溶剂。听我讲完 第2点后，其实就应该清楚Seph adex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂 洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用10 0％甲醇冲柱。正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇， 逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。 4 接下来讲样品的处理和洗脱溶剂的选择。如果样品极性大，这选用反相溶剂 洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶 解，过滤后，湿法上样（一定要滤喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得将 Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀）。如果样品极性小，这选用正 相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤 后，湿法上样。 5 分离的技巧，最后说说我的使用心得 （1） 流速不可太快，切切不可新急，所谓欲速则不达。 （2）柱子尽可能长， Sephadex LH20 柱长的增加将极大地改善分离，所不 要吝惜填料，宁可将填料全装在一根大柱子中，不要将填料装成几根小柱。所 谓集中优势兵力，打击敌人。 （3） 馏分一定要接的细，可1／10，或1／20 个保留体积接成一馏分。 （4） 洗脱体积一般为2-3个保留体积，对特殊保留强的化合物，可洗脱5个保 留体积。 （5）鞣质成分死吸附严重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣质 （6）Sephadex LH20 对黄酮类成分的分离效果极佳，方法很成型，有大量 文献参考。 （7）填料反复使用，每次用完，一般可用甲醇将柱子洗干净，然后用下一次分 离的起步溶剂将甲醇替换出来，待用。 |
5楼2010-04-01 23:20:47
