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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】鲑鱼精DNA怎么处理啊
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bellams

[交流] 【求助/交流】鲑鱼精DNA怎么处理啊 已有1人参与

我最近想用氯化锂的方法做转化酵母，但是不知道鲑鱼精DNA要怎么处理，看到网页上有一种处理方法，也不是很明白，想请教你一下。
鲑鱼精DNA

说明：生化研究。
CAS＃：9007-49-2
外观：白色线状
特性：Linkage：Formerly listed as Type III
溶解性：溶于水，参考浓度2mg/ml
储存条件：2-8℃
From Sigma D1626
Salmon DNA 的配制：
组份浓度10 mg/ml Salmon DNA ;配制量约100 ml
配制方法:
1. 称取鲑鱼精DNA 2 g置于500 ml烧杯中，加入约200 ml的TE Buffer。
2. 用磁力搅拌器室温搅拌2～4小时，溶解后加入4 ml的5 M NaCl，
使其终浓度为0.1 M。
3. 用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。4. 回收水相溶液后，使用17号皮下注射针头快速吸打溶液约20
次，以切断DNA。
5. 加入2倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀。
6. 离心回收DNA后，溶解于100 ml的去离子水中，测定溶液的OD260值。
7. 计算溶液的DNA浓度后，稀释DNA溶液至10 mg/ml。
8. 煮沸10分钟后，分装成小份(1 ml/份)。-20℃保存。
9. 使用前在沸水浴中加热5分钟后，迅速冰浴冷却。

第3步中苯酚和氯仿的用量是多少啊，我查了很久，都没找到。
还有第五步中的乙醇用的是无水乙醇吗？
请做过这个实验的大侠指点一下。
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1楼 2010-03-23 09:07:07
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1，一般抽提时所加的苯酚或者苯酚/氯仿体积应该等同于你要抽提的体系。
2，是的
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2010-03-23 15:10:13
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bellams

引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-03-23 15:10:13:
1，一般抽提时所加的苯酚或者苯酚/氯仿体积应该等同于你要抽提的体系。
2，是的

谢谢你！那苯酚/氯仿的体积比试1:1吗？
赞一下 回复此楼
3楼2010-03-23 15:53:03
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gaolef4s

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
转化酵母要求没那么高，直接加水至合适浓度，在沸水中煮10分钟溶解即可直接使用。不用那么麻烦。
赞一下(1人) 回复此楼
这一切都会过去！
4楼2010-03-23 16:27:17
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bellams

引用回帖:
Originally posted by gaolef4s at 2010-03-23 16:27:17:
转化酵母要求没那么高，直接加水至合适浓度，在沸水中煮10分钟溶解即可直接使用。不用那么麻烦。

啊？真的吗？我买的是粉末，这么简单的处理可以吗
赞一下 回复此楼
5楼2010-03-23 19:23:36
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白云恪

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我最近也在做，买的也是粉末，也不知道怎么处理呢，期待高手进来
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-11-29 16:53:45
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