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zhiwu7386

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求扫描电镜植物样品制备的简单方法? 已有2人参与

我看到一种方法只用了液氮干燥,然后切成碎片再冷冻干燥,其样品看起来基本没变形,可我用液氮一冻就变形了,有没有什么窍门即简单又不用使植物变形?
The plants were separated into roots, stems, and leaves, frozen in liquid nitrogen, and then fractured into small pieces with a blunt knife. The pieces were freeze-dried overnight at -30 度 while under a vacuum (15-25 torr) using a Labconco freezeedry system (Freezone 4.5, Labconco, Kansas City, MO, USA). Samples were mounted on aluminum stubs with double-sided carbon tape. The SEM  bservations were performed using a JEOL JSM-5400 LV scanning electron microscope in low vacuum mode using backscattered electron imaging.

[ Last edited by 1949stone on 2010-3-23 at 13:51 ]
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zhiwu7386

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by zhiwu7386 at 2010-03-23 08:20:13:
我看到一种方法只用了液氮干燥,然后切成碎片再冷冻干燥,其样品看起来基本没变形,可我用液氮一冻就变形了,有没有什么窍门即简单又不用使植物变形?
The plants were separated into roots, stems, and leaves ...

怎么没人回答呀?
2楼2010-03-25 15:20:54
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
zhiwu7386(金币+1): 2010-04-01 05:48
lstt09nk(金币+3):感谢交流,热心虫友~~ 2010-05-29 22:11:53
zhiwu7386(金币+1): 2010-05-30 06:55:28
不知道你的材料属于什么类型的。如果可以,参照如下程序:
用Ph7.2磷酸盐缓冲液清洗。之后用2.5﹪戊二醛前固定24h(放入0-4℃冰箱中)即可。乙醇系列30﹪-50﹪-70﹪-85﹪-95﹪-100﹪(2次)逐级脱水(在第一次用100%乙醇脱水的时候将临界点干燥仪降温至-10℃),每级15min,并适当摇动,保证脱水干净。第一步用醋酸(异)戊酯:乙醇=1:1的混合液浸泡10min,第二步用醋酸异戊酯浸泡10min,适当摇动。临界点干燥:代换后的样品转入样品篮中,放进预冷的临界点干燥仪样品室内,盖好室盖后注入液体二氧化碳,以淹没样品为准,再升温至35℃让其气化,观察液体全气化后慢慢放气,必须待气放尽才能开盖取样(2-3小时)
3楼2010-03-31 20:52:55
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cdchen2003cd

捐助贵宾 (正式写手)


zhiwu7386(金币+1): 2010-05-30 06:55:34
您要观察什么呢,用环境扫描电镜的低真空不就可以观察植物吗?不用脱水的
4楼2010-05-10 15:24:20
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tdong06

木虫 (正式写手)


lstt09nk(金币+1):谢谢分享经验~~ 2010-05-29 22:12:10
zhiwu7386(金币+1): 2010-05-30 06:55:39
我做过,动作要快,切片可以适当厚点,例如20-30微米。
5楼2010-05-29 21:45:16
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