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【求助/交流】PCR不稳定。。。
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RT，我现在需要从质粒上P一段序列，刚开始摸索条件都还好好的，后面想大量PCR进行回收，结果就出事了，结果却没有条带。。 摸索条件的时候只做了1管，做大量的时候做8管，每台PCR仪放4管，结果就是没有条带，郁闷。。。。 已经做了好几次都是这样了，甚至都重新设计了引物，  做大量的时候，不管是每管分别加还是分装结果都是一样。。。我甚至都认好了PCR仪的孔。。。。快被这个不稳定的PCR搞崩溃了。。。各位有遇到这种情况吗？你们都怎么解决的啊？希望大家都来说说，谢谢。。。 |
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23楼2010-01-18 10:51:38
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2楼2010-01-16 12:24:58
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3楼2010-01-16 12:39:08
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这里的原因我可以帮助分析一下，但愿对你有用 是这样的，如果你做一管PCR，那么所有的药品都是一样一样加的，而如果做8管，相信你是8管一起混合好，然后分装后单加模板的。那么这里就存在一个小问题，所有药剂混合分装和单独一个一个加，理论上是一样的，但是实际上有些溶液比较粘稠，当单加量特别小的时候，就被枪头上附着的量给人为扩大了，这里很明显，Taq酶正是这样的，单加量很小，枪头上粘很多，单放的时候你会多加很多 所以你应该知道改变什么条件也许会是PCR稳定了，但是我也只是分析，仅供参考 |
4楼2010-01-16 12:58:14