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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】革兰氏阳性菌细胞2D用总蛋白样品制备方法？
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yierangel

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】革兰氏阳性菌细胞2D用总蛋白样品制备方法？ 已有2人参与

本人刚开始接触蛋白双向电泳领域，实验需要用芽孢杆菌作为实验材料。可是阳性菌细胞壁破壁困难，超声破碎的效果极差，压力破碎的产热量又较高，请问各位大牛们有没有其他较好的破壁效果好又能尽可能的保持蛋白活性的方法？用溶菌酶处理会不会对双向电泳结果产生不良的影响？小女子先感谢各位虫友了！
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1楼 2010-01-12 19:18:27
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magiccat

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用专门的细胞裂解液，反复冻融裂解液可以
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3楼2010-01-13 16:32:26
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hhwang

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
溶菌酶 控制好浓度和时间
超声破碎的肽聚糖残片会包裹蛋白，所以效果不好
还可以采用压差破细胞，但是肽聚糖的问题还是要解决
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2楼2010-01-12 22:54:05
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yierangel

金虫 (小有名气)
溶菌酶也是一种蛋白啊，染色后也会在胶上成像的~~
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4楼2010-09-30 12:32:09
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ououcao

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
同求。我做肺炎链球菌，超声破壁也非常难。反复冻融也没多大效果！
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5楼2012-02-29 11:09:40
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