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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】16SrDNA扩不出来怎么回事呢
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刁蛮

[交流] 【求助/交流】16SrDNA扩不出来怎么回事呢

RT，做了10株细菌的16SrDNA PCR，引物，酶等量都是一样的，只有DNA按照提取的含量不同加入不同体积的模板DNA，以达到DNA量为40ng/uL，结果是只有3个细菌扩增出来了大约1.5kb的片段，其他都没有，谁知道怎么回事呀？是DNA模板问题吗
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1楼 2010-01-03 21:32:16
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不一定，也可能是引物的问题，16s引物为通用引物，不可能对所有细菌都有很好的特异性，可以用touchdown PCR试试。
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Thank-you，so-blue.
2楼2010-01-03 21:39:31
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
DNA浓度还需要再调整一下，虽然量基本一致，但质量还是有差别的，另外，楼上说touch down很有道理
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3楼2010-01-04 09:21:53
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刁蛮

谢谢楼上的亲们，貌似我们这还没有做降落PCR的呢。。。
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4楼2010-01-04 13:35:31
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刁蛮

DNA浓度调整了，依然没有带，特异性扩增的杂带都没有……
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5楼2010-01-05 17:33:16
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biocontrol

金虫 (小有名气)
确定是细菌吗
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裸奔进行时...
6楼2010-01-05 19:57:24
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
调整退火温度
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帮助虫友，提升自己
7楼2010-01-05 22:31:32
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我遇到所有做不出来的PCR，都是酶不好
一个是Takara系列的酶扩痕量模板
一个是用Pfx扩具有发夹结构的短片段

Invitrogen的Platinum Taq可以通杀我曾经没做出来的
以及Promega的GoTaq
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8楼2010-01-05 22:33:28
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刁蛮

谢谢楼上滴兄弟姐妹们~嚯嚯我去试试
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9楼2010-01-06 10:32:00
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