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刁蛮

[交流] 【求助/交流】16SrDNA扩不出来怎么回事呢

RT,做了10株细菌的16SrDNA PCR,引物,酶等量都是一样的,只有DNA按照提取的含量不同加入不同体积的模板DNA,以达到DNA量为40ng/uL,结果是只有3个细菌扩增出来了大约1.5kb的片段,其他都没有,谁知道怎么回事呀?是DNA模板问题吗
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不一定,也可能是引物的问题,16s引物为通用引物,不可能对所有细菌都有很好的特异性,可以用touchdown PCR试试。
Thank-you,so-blue.
2楼2010-01-03 21:39:31
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

DNA浓度还需要再调整一下,虽然量基本一致,但质量还是有差别的,另外,楼上说touch down很有道理
3楼2010-01-04 09:21:53
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刁蛮

谢谢楼上的亲们,貌似我们这还没有做降落PCR的呢。。。
4楼2010-01-04 13:35:31
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刁蛮

DNA浓度调整了,依然没有带,特异性扩增的杂带都没有……
5楼2010-01-05 17:33:16
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biocontrol

金虫 (小有名气)

确定是细菌吗
裸奔进行时...
6楼2010-01-05 19:57:24
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

调整退火温度
帮助虫友,提升自己
7楼2010-01-05 22:31:32
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我遇到所有做不出来的PCR,都是酶不好
一个是Takara系列的酶扩痕量模板
一个是用Pfx扩具有发夹结构的短片段

Invitrogen的Platinum Taq可以通杀我曾经没做出来的
以及Promega的GoTaq
8楼2010-01-05 22:33:28
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刁蛮

谢谢楼上滴兄弟姐妹们~嚯嚯我去试试
9楼2010-01-06 10:32:00
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