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gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)

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专业: 基因组学

[交流] 【求助/交流】增加引物量有作用吗？

PCR 结果一直不好。后来增加了模板量，有些样品扩增出来了，但有些还是没条带。现在感觉就剩增加引物这一个能改善的条件了。不知这个会不会有作用？因为模板不多了，所以不敢轻易尝试啊。在此向有经验的同学请教一下。

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1楼 2009-12-18 05:17:21

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yujiaping1

木虫 (著名写手)

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虫号: 929883
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性别: MM
专业: 疫苗学

这样讲吧，通常引物用量不会有影响，但是如果引物量过低还是存在问题的，一般就是25ul体系，10uM的引物1ul足以。你所说的情况，增加了模版量有些就出带了，恐怕是模版浓度低的原因，可以试着再增加一点模版用量。如果模版很珍贵，就只能缩小反应体系来实验了，不要太小啊，太小不稳定因素太多，10ul的体系已经接近极限了

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13楼2009-12-21 21:17:20

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jlzkchong

新虫 (初入文坛)

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专业: 生化与分子生物

★ ★ ★ ★ ★
1949stone(金币+4,VIP+0):谢谢 12-18 12:47
gdongli8325(金币+1,VIP+0): 12-18 15:44

引用回帖:

Originally posted by gdongli8325 at 2009-12-18 05:17:
PCR 结果一直不好。后来增加了模板量，有些样品扩增出来了，但有些还是没条带。现在感觉就剩增加引物这一个能改善的条件了。不知这个会不会有作用？因为模板不多了，所以不敢轻易尝试啊。在此向有经验的同学请教一 ...

不知道你的模板是什么？如果是质粒DNA的话，可以转化大肠杆菌，长出单菌落后挑斑摇菌，提质粒。增加引物量是没什么用的，扩增不到目的片段，估计只能是模板中所含你的目的片段量很少，你可以回收已经扩增出来的目的条带，用回收产物再做PCR

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2楼2009-12-18 09:44:19

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