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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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gdongli8325

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】增加引物量有作用吗?

PCR 结果一直不好。后来增加了模板量,有些样品扩增出来了,但有些还是没条带。现在感觉就剩增加引物这一个能改善的条件了。不知这个会不会有作用?因为模板不多了,所以不敢轻易尝试啊。在此向有经验的同学请教一下。
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peter9171


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引物序列是最重要的因素,其次是退火温度,引物量的增加不仅意义不大,过量的引物反而不好,容易形成引物二聚体,建议你重新设计一下引物
12楼2009-12-19 11:30:02
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查看全部 14 个回答

jlzkchong

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★
1949stone(金币+4,VIP+0):谢谢 12-18 12:47
gdongli8325(金币+1,VIP+0): 12-18 15:44
引用回帖:
Originally posted by gdongli8325 at 2009-12-18 05:17:
PCR 结果一直不好。后来增加了模板量,有些样品扩增出来了,但有些还是没条带。现在感觉就剩增加引物这一个能改善的条件了。不知这个会不会有作用?因为模板不多了,所以不敢轻易尝试啊。在此向有经验的同学请教一 ...

不知道你的模板是什么?如果是质粒DNA的话,可以转化大肠杆菌,长出单菌落后挑斑摇菌,提质粒。增加引物量是没什么用的,扩增不到目的片段,估计只能是模板中所含你的目的片段量很少,你可以回收已经扩增出来的目的条带,用回收产物再做PCR
2楼2009-12-18 09:44:19
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yiyiglad

★ ★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0):是个好办法 12-18 12:48
gdongli8325(金币+1,VIP+0): 12-18 15:44
循环数加大,然后将扩增产物回收,进行二次扩增
3楼2009-12-18 10:05:17
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liyong1981

金虫 (正式写手)


★ ★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0):同意 12-18 12:48
gdongli8325(金币+1,VIP+0): 12-18 15:44
引物增加基本没什么用的。,引物的设计很重要
4楼2009-12-18 10:55:54
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