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runxiaoli

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于3'RACE的很奇怪的现象,求助大家乐

各位同仁:
       你们好。
      最近我在做3‘race。可是遇到的问题让我觉得很奇怪。
      我已经拿到了中间片段,设计了4个上游引物来进行pcr,都跑出带了,送出去测序,也都扩到了polyA,可是blast还不是我要的基因。我想问一下这是什么原因。是不是和我换了模板有关系,第一次做的时候,用的是SA处理后的模板,第二次用的则是NACL处理的,但是做中间片段的时候,跑出的带是一致的。
    很奇怪出现这个问题,不知道各位同仁有什么好的建议没有。
    希望大家给我出谋划策,不胜感激。
    祝大家快乐,身体健康,一切顺利。
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wwyy0818

新虫 (小有名气)


runxiaoli(金币+1,VIP+0):非常感谢。 12-15 11:09
我在构建cDNA文库的时候,用第二链cDNA做模板特异性的筛选某些CDS,也会出现同样的问题,主要原因是引物特异性不强。建议:
既然已经拿到了中间序列,那么,请以该中间序列为下游引物,P出该CDS的起始区(起始密码子到你的中间序列这一段序列),然后再以该起始区为正向引物,即可P出全长
8楼2009-12-15 11:07:21
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