24小时热门版块排行榜

返回列表

当前主题已经存档。

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

刘仕博

金虫 (著名写手)

应助: 2 (幼儿园)
贵宾: 0.203
金币: 1435.9
散金: 2
红花: 2
帖子: 1321
在线: 182.8小时
虫号: 797250
注册: 2009-06-23
性别: MM
专业: 环境工程

[交流] 【求助/交流】被 real time-PCR折磨的孩子又来提问~

不好意思又来麻烦大家，不过还是厚着脸皮发个小贴~
最近我买了新的引物。像之前哪位高手建议过的，我先做了次PCR，觉得引物没有问题，就直接用real time-PCR做了primer test。
什么都可以就是扩增效率不够，在70-80%。引物的Tm值在64度左右，所以我设置的退火温度是58度。
如果想提高扩增效率我该怎么做呢？增加模板的浓度？改变退火温度？
感激不尽！

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有205人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

生命在于折腾~

1楼2009-12-10 10:52:05

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

刘仕博

金虫 (著名写手)

应助: 2 (幼儿园)
贵宾: 0.203
金币: 1435.9
散金: 2
红花: 2
帖子: 1321
在线: 182.8小时
虫号: 797250
注册: 2009-06-23
性别: MM
专业: 环境工程

最近感觉自己一天就围着引物转，甚至有人说我现在的状态不好，不适合实验。
刚才就在我打算重新再来的时候忽然又发现了个问题，看似不大，但我感觉还挺麻烦的。
我们一般在bioneer订引物，不过一般在网上设计的引物的Tm值会比订单上面的低个2度。刚才又在NCBI上面搜索了下，发现那里面的引物的温度比之前引物设计软件上面给的低个2度。这样一来就差了近5度，可不是开玩笑的呀。有成功的也有没成功的。我一般都按订单上面的温度做的，当然没成功的占多数，呵呵！
而且我还有一点很迷惑，按照Tm值的计算公式，我的引物长度都是24，然后12个C+G,12个A+T，这样的话就正好应该是60度呀，怎么会是这样呢？
一会打算按照NCBI上面的温度做一次，一旦有什么结果再向大家报告，呵呵~