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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 急！毕赤酵母表达问题
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x8q4h11

木虫 (小有名气)

[交流] 急！毕赤酵母表达问题 已有1人参与

构建了毕赤酵母GS115重组菌，使用甲醇诱导就是诱导不出来，请大家帮忙分析分析，不胜感激！
我是用的是载体是pPIC3.5K，提基因组使用目的基因自身的引物和5AOX、3AOX都能PCR成功，能确定是阳性重组菌，可就是诱导不出来……
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1楼 2009-11-26 12:43:06
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your2007

至尊木虫 (著名写手)
要用载体特异性引物p吧，另外整合方向怎么样要清楚哦，
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爱人者被爱，敬人者人敬
2楼2009-11-26 13:05:03
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
pPIC3.5K是包内表达吧
用什么方法检测没有表达的
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3楼2009-11-26 15:22:54
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x8q4h11

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhaocy8903 at 2009-11-26 15:22:
pPIC3.5K是包内表达吧
用什么方法检测没有表达的

SDS-PAGE   没有目的蛋白条带……
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4楼2009-11-26 22:33:55
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x8q4h11

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by your2007 at 2009-11-26 13:05:
要用载体特异性引物p吧，另外整合方向怎么样要清楚哦，

5AOX、3AOX就是引物特异性引物，能P出来，就是诱导不出来
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5楼2009-11-26 22:35:12
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
包内表达破菌后条带很多，建议用WESTERN
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6楼2009-11-27 08:11:38
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x8q4h11

木虫 (小有名气)
做过的虫友指点指点吧……谢谢
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7楼2009-11-29 13:24:50
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boylx1006

新虫 (初入文坛)

酵母表达检测

★
x8q4h11(金币+1,VIP+0): 12-7 12:44
酵母表达蛋白的检测可以采用SDS-PAGE、Western-blot和ELISA检测。如果电泳看不出来就是可能是酵母表达的上清太稀，可以浓缩一下再电泳！
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8楼2009-12-05 20:25:20
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
内分泌表达的话可以破壁后，取上清和沉淀分别检测，如果条带有的可以看出来，有的很淡的话，可以考虑浓缩
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将有能量帮助他人作为自己的人生追求！
9楼2010-05-20 08:12:38
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