24小时热门版块排行榜    

查看: 2782  |  回复: 15
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

pidou

木虫 (正式写手)

[交流] 【交流/求助】关于5‘-RACE和3’-RACE的问题

1、在获取cDNA全长的时候,5‘-RACE和3’-RACE都是以mRNA为模板,还是以第一链cDNA为模板的呢??
2、在获取cDNA全长的时候,5‘-RACE和3’-RACE都要使用呢??还是只使用一种技术就可以了呢??

期待高手的答复,希望回复的详细一点,谢谢,在线等....

[ Last edited by amisking on 2009-12-23 at 12:22 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西-南

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 西-南 at 2009-12-30 09:23:

是没有目的条带。用外引物反转录后用内引物扩,只有100的带,用随机引物和oligo dT反转录,做巢式,只有不到一百的带。而且这两个带都很亮。我以前测序过第一次扩增的两个和目的条带大小接近的带,都不是目的条 ...

谢谢,我再改进下看看
16楼2009-12-30 16:47:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

liyong1981

金虫 (正式写手)



pidou(金币+1,VIP+0):希望高手继续相助 11-19 11:41
不管3还是5都要mRNA做模板的,先逆转录第一链即可,然后用第一链做RACE。获得CDNA全长肯定要两断都要做了!个人认为3RACE容易出啦,因为你有polyA锚定引物。5RACE一般很难做出完整的5端上游序列,即使用试剂盒。但扩出你需要的ORF一半冒得问题。
2楼2009-11-19 11:04:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)


或者送公司做,RACE传统的方法做,很折磨人~
3楼2009-11-19 11:05:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白3521

金虫 (小有名气)

我的3‘和5’race用的takara的试剂盒,3’比较好做一点,步骤也比较少,5‘复杂一些,都需要用RNA转录成带有试剂盒中的接头引物的cDNA,再P,然后用你获得的5’和3’序列拼接成你的全序列,设计引物,在普通的cDNA中扩全长基因
4楼2009-11-19 11:13:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见