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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 急求：构建载体时引物设计的问题
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playboy723

金虫 (正式写手)

[交流] 急求：构建载体时引物设计的问题 已有4人参与

想构建一个基因的表达载体   当初设计引物时没太注意  可是现在连上了却发现 该基因的起始密码子ATG之前竟然有终止密码子TGA    我现在不知道该怎么办了    这个基因还能表达吗？    好在多克隆位点到TGA之间没有ATG  就是说基因中的ATG是唯一的      所以我想请问一下TGA影响这个基因的表达吗？   应该不会是吧？   大家帮我分析一下啊

[ Last edited by amisking on 2009-11-12 at 13:28 ]
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1楼 2009-11-12 13:11:50
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-06-23 06:24:35
引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-11-12 13:18:31:

应该没有关系，如果你的启动子足够强的话是完全可以表达的，但是你启动子的启动能力较弱的话就很难说了，你可以试试看。不过最好还是避免这种情况的出现。

TAG跟启动子有什么关系？

TAG是终止密码子，是翻译的终止信号，终止的是核糖体上肽链的延伸

启动子是转录的调控序列，影响的是premRNA合成，两个就不是一个层面上的东西

理论上ATG之前的TAG不会影响表达，因为起始复合体体向3'端移动，寻找第一个AUG的过程中，这个时候结合的tRNA是Met-tRNAi，不会识别UAG，肽链还没有开始合成，哪来的终止一说呢？
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6楼2010-06-22 19:22:57
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 11-12 13:27
引用回帖:
Originally posted by playboy723 at 2009-11-12 13:11:
想构建一个基因的表达载体   当初设计引物时没太注意  可是现在连上了却发现 该基因的起始密码子ATG之前竟然有终止密码子TGA    我现在不知道该怎么办了    这个基因还能表达吗？    好在多克隆位点到TGA之间没有 ...

应该没有关系，如果你的启动子足够强的话是完全可以表达的，但是你启动子的启动能力较弱的话就很难说了，你可以试试看。不过最好还是避免这种情况的出现。
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2楼2009-11-12 13:18:31
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playboy723

金虫 (正式写手)
谢谢回帖  我的启动子是CMV   这个可以吗？  能用吗？
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3楼2009-11-12 13:29:31
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by playboy723 at 2009-11-12 13:29:
谢谢回帖  我的启动子是CMV   这个可以吗？  能用吗？

CMV似乎是个极强的启动子吧，那样的话表达肯定是没有问题的。不过我没有用过这个启动子，个人意见！
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4楼2009-11-12 14:13:39
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