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playboy723

金虫 (正式写手)

[交流] 急求:构建载体时引物设计的问题 已有4人参与

想构建一个基因的表达载体   当初设计引物时没太注意  可是现在连上了却发现 该基因的起始密码子ATG之前竟然有终止密码子TGA    我现在不知道该怎么办了    这个基因还能表达吗?    好在多克隆位点到TGA之间没有ATG  就是说基因中的ATG是唯一的      所以我想请问一下TGA影响这个基因的表达吗?   应该不会是吧?   大家帮我分析一下啊

[ Last edited by amisking on 2009-11-12 at 13:28 ]
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

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amisking(金币+2,VIP+0): 11-12 13:27
引用回帖:
Originally posted by playboy723 at 2009-11-12 13:11:
想构建一个基因的表达载体   当初设计引物时没太注意  可是现在连上了却发现 该基因的起始密码子ATG之前竟然有终止密码子TGA    我现在不知道该怎么办了    这个基因还能表达吗?    好在多克隆位点到TGA之间没有 ...

应该没有关系,如果你的启动子足够强的话是完全可以表达的,但是你启动子的启动能力较弱的话就很难说了,你可以试试看。不过最好还是避免这种情况的出现。
2楼2009-11-12 13:18:31
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playboy723

金虫 (正式写手)

谢谢回帖  我的启动子是CMV   这个可以吗?  能用吗?
3楼2009-11-12 13:29:31
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


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引用回帖:
Originally posted by playboy723 at 2009-11-12 13:29:
谢谢回帖  我的启动子是CMV   这个可以吗?  能用吗?

CMV似乎是个极强的启动子吧,那样的话表达肯定是没有问题的。不过我没有用过这个启动子,个人意见!
4楼2009-11-12 14:13:39
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wlx_lara

银虫 (初入文坛)

不明白  呵呵  太高深了
5楼2010-06-22 18:50:42
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ben1147

木虫 (正式写手)

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reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-06-23 06:24:35
引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-11-12 13:18:31:

应该没有关系,如果你的启动子足够强的话是完全可以表达的,但是你启动子的启动能力较弱的话就很难说了,你可以试试看。不过最好还是避免这种情况的出现。

TAG跟启动子有什么关系?

TAG是终止密码子,是翻译的终止信号,终止的是核糖体上肽链的延伸

启动子是转录的调控序列,影响的是premRNA合成,两个就不是一个层面上的东西

理论上ATG之前的TAG不会影响表达,因为起始复合体体向3'端移动,寻找第一个AUG的过程中,这个时候结合的tRNA是Met-tRNAi,不会识别UAG,肽链还没有开始合成,哪来的终止一说呢?
6楼2010-06-22 19:22:57
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kaixin179

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不会影响的,会正常表达,楼主带标记了吧,可以鉴定一下。
生物必成朝阳产业,甘做拓荒牛!
7楼2010-06-22 22:27:28
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pidou213

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-06-22 19:22:57:


TAG跟启动子有什么关系?

TAG是终止密码子,是翻译的终止信号,终止的是核糖体上肽链的延伸

启动子是转录的调控序列,影响的是premRNA合成,两个就不是一个层面上的东西

理论上ATG之前的TAG不会影响 ...

这位哥们是牛人,信他吧
见得多爱的多
8楼2010-06-22 23:33:43
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