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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR刚开始扩的很好，后来就扩不出来了怎么回事？
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)

[交流] PCR刚开始扩的很好，后来就扩不出来了怎么回事？ 已有7人参与

第一次用的降落pcr,条带很清晰，跑了marker,确实是目的条带。可是仅仅隔了两天就死活扩不出来了！扩增条件和扩增体系都和两天前是一样的，酶是新的才用了几次不可能出问题的！也换了模板，换了电泳液和胶，也注意了混匀等细节还是p不出不来！
郁闷死了！
有没有有经验的指点一下？谢谢各位！

[ Last edited by amisking on 2010-8-14 at 22:28 ]
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1楼 2009-10-30 20:46:36
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六妖妖

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 11-10 11:28
一般遇到这种事情，首先换酶。可以用其他人正在用，而且能做出结果的酶。虽然酶是新的，但不一定酶的质量就是好的。
然后是换模板。引物可以直接跑胶检测的。不知道你的引物稀释到怎样的情况。Touchdown是个不错的方法，但是我个人还是觉得若不是特别难P的东西，最好还是摸索出一个常规的PCR protocol会更好点。
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18楼2009-11-10 11:16:34
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Entrez1110

★
小木虫(金币+0.5):恭喜抢沙发，给个红包
引物有没有降解？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2009-10-30 20:50:33
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goodwish

木虫 (正式写手)

木虫书呆子
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
很可能是引物出问题了。
赞一下(1人) 回复此楼
生命的海洋里，我是蓝色的一滴
3楼2009-10-30 20:55:32
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by goodwish at 2009-10-30 20:55:
很可能是引物出问题了。

引物不会降解那么快吧？用了没有几次，再说我这前后也就隔了两天。
赞一下 回复此楼
4楼2009-10-30 21:01:49
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