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lililxmc

木虫 (正式写手)

[交流] 求助血管内皮细胞培养问题(急)已有2人参与

求助。我从四医大购买的血管内皮细胞EVC-304, 拿回来时,将细胞培养瓶里灌满的培养基(1640+胎牛血清)收集后直接用于培养,增值后冻存了十多管(DMSO:胎牛血清=1:9),一个星期后再复苏,自己配的1640,细胞刚开始看着是圆形透亮,轮廓清晰,但12h就全死了,当时同一期买了4株细胞,都一起冻存的,一起复苏其他几株都长的挺好的。郁闷很,求助,高手帮帮忙,看我错在哪了,还是这个细胞要添加什么因子才可以啊?

[ Last edited by lililxmc on 2009-10-26 at 16:07 ]
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weiyanbme

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
最好加HAT培养基(HAT系次黄嘌呤(hypoxantin)、氨基蝶呤(aminopterin)和胸腺嘧啶脱氧核苷(thymidin)三种物质各英文首字之缀列,HAT培养基也就是指含有这三种物质的细胞培养基。),我当时想养HUVEC时,老师说要加HAT,我就问了下试剂公司,说是sigma的,好贵,我就没养,你可以问问
还有在复苏的时候建议离心下,去除DMSO等;在冻存的时候减少DMSO的量
我看到ATCC上用的都是5%的量
祝好运
7楼2010-06-03 11:53:15
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