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magy2006

木虫 (著名写手)

[交流] 关于用基因组DNA扩增基因

最近在用基因组模板扩增某个基因,在扩出完整的预期大小后,还扩到了一个小一些的片段,blast比对,发现二者高度同源,有大的序列重叠区,但也有不一样的区域,这个小片段用cDNA却扩不出来,请问这是什么原因阿 ?
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genetics183

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
同一家族的不同成员。
其表达可能具有特异性,导致cDNA克隆不到,或者就是一个拟基因。
士虽有学,而行为本焉。
6楼2009-10-19 21:01:47
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by magy2006 at 2009-10-19 14:52:
最近在用基因组模板扩增某个基因,在扩出完整的预期大小后,还扩到了一个小一些的片段,blast比对,发现二者高度同源,有大的序列重叠区,但也有不一样的区域,这个小片段用cDNA却扩不出来,请问这是什么原因阿 ?

是不是引物的特异性不好?扩增了一段基因后同时也扩增了扩增了另一段同源序列?
3楼2009-10-19 16:46:14
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yituyitu

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可能你扩增的区域在基因组上有多拷贝,而且不同拷贝之间有差异
4楼2009-10-19 16:49:05
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崔红利

新虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
应该是内含子   还有就是可以考虑重新设计引物进行PCR  试试吧
5楼2009-10-19 16:55:06
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