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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR反应两条引物Tm值相差很多怎么办？
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)

[交流] PCR反应两条引物Tm值相差很多怎么办？

PCR反应时，两条引物Tm值相差很多。大家都是怎么选择的？选择中间值还是怎样？谢谢各位！
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1楼2009-10-19 09:29:41
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-19 23:04:

对啊，不要有什么心理压力嘛，我觉得很简单，很正常的。

谢谢谢谢！
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22楼2009-10-20 09:06:50
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-19 23:04:

对啊，不要有什么心理压力嘛，我觉得很简单，很正常的。

还有一个问题，
我的Tm值 引物报告合成单上的和自己用软件计算出来的不一样，有一个相差6  我该用哪个比较好呢？
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23楼2009-10-20 09:09:03
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-19 17:08:
其实我觉得影响不大，每次我都不按照Tm值PCR都，一般都用55℃拉，一般都可以拉的出来，不行的话就降低一下退火温度。

我用降落PCR  79到63  每个循环降0.5  没有出来条带   

又做了梯度PCR，从56到61  还是没有条带-------
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25楼2009-10-23 16:38:57
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
昨天按原来的程序，降落PCR,从79到63，把延伸时间改为15分钟，循环改为35，酶换了mixture,出来了
明天再做一遍，检验一下
如果出来了，再向大家汇报哈
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29楼2009-10-25 16:05:07
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
用降落PCR做出来了，79到71，循环数从25增加到35
循环数有很大影响吗？我在进一步验证

谢谢各位了！
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31楼2009-10-29 11:06:13
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彩云朵朵

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zsl2000001 at 2009-10-29 15:20:
做个梯度试试吧

是做的梯度，可是令人郁闷的是，前几天可以P出来，现在用同样的条件竟然P不出来了！
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35楼2009-10-29 21:43:02
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