| 查看: 450 | 回复: 3 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 专注多肽 的 2 个金币 ，回帖就立即获得 1 个金币，每人有 1 次机会 | |||
[交流]
基于多步衍生化的GC-MS法测定胸腺法新中D型氨基
|
|||
|
摘要: 建立多步衍生化气相色谱-质谱(GC-MS) 测定手性氨基酸的方法, 并结合氘代盐酸水解应用于胸腺法新 中 9种D型氨基酸的含量测定。以异丙醇和三氟乙酸酐为衍生化试剂, 对多步衍生化的反应条件、供试品复溶试剂 的体积、色谱及质谱条件进行优化, 建立胸腺法新中 9种氨基酸测定方法, 考察灵敏度、线性范围、精密度、准确度和 加标回收率等。结果表明, 16对D/L型氨基酸和 Gly衍生物在29min内实现基线分离; 胸腺法新中的 9种氨基酸衍 生产物在一定浓度范围内线性关系良好 (r2>0.992 3); 定量限低至 0.09～2.79 μmol ·L- 1; 精密度实验结果表明RSD< 10.90%; 对照品准确性实验的平均回收率为 76.69%～128. 18%; 样品平均加标回收率在 70.41%～125.39%之间。6 批胸腺法新原料药中D-Asp和D-Glu含量较高, 分别为 0.41%～0.49%和 0.25%～0.33%, 其他D-氨基酸含量均小于 0.25% 。本方法高效、准确、专属性好, 可同时监控胸腺法新中 9种D型氨基酸含量, 有望为合成多肽药物全面控制 杂质提供新的研究思路。 胸腺法新 (thymalfasin) 是由 10 种L- 氨基酸组成 的合成二十八肽, 其制剂注射用胸腺法新在临床上主 要用于免疫缺陷, 病毒感染以及肿瘤的治疗, 并且在缺 少新冠肺炎特效药的背景下作为免疫增强药物被广泛 使用, 因此该多肽药物的质量控制显得至关重要。除 中国药典 (ChP2015) 外, 其他各国药典均未收载胸腺 法新及其制剂。ChP2015中胸腺法新及其有关物质的 分析多采用基于杂质对照品的HPLC法[1-3] 。消旋肽为 多肽链中含一个或多个非预期手性构型的氨基酸残基 所形成的肽链[4], 由于该类杂质与主成分的结构差异 小、色谱分离困难且合成杂质对照品的成本较高, 因此 HPLC法无法对潜在的所有消旋肽进行全面控制。目 前该类杂质的最新质控思路是将合成多肽完全水解成 游离氨基酸, 通过分离及计算D/L 氨基酸的相对含量 来对消旋肽杂质进行间接控制[5] 。美国药典(USP42)[6] 就是采用 GC-MS 方法对水解后艾塞那肽中D-His 和 L-His响应值的相对比例进行测定, 以控制D-His1 消旋 肽杂质含量。该方法具有无需合成多肽杂质对照品, 且 不要求消旋肽在色谱上完全分离等优势。目前USP42 的方法仅对艾塞那肽中D-His进行控制, 但 GC-MS良 好的分辨率和灵敏度[7,8] 有望从氨基酸角度全面监控 多肽中所有氨基酸发生消旋化的可能性。因此, 本文 旨在建立基于 GC-MS 的常见氨基酸分析方法并应用 于胸腺法新的质量控制。 为了测定氨基酸需要先将多肽进行水解, 而水 解过程不可避免会引起少量手性氨基酸消旋化 。因 此, 本文采用氘代盐酸/重水溶液 (deuterium chloride/ deuterium oxide, DCl/D2O) 水解胸腺法新, 该方法可以 使在水解过程中发生外消旋的氨基酸手性碳 (“-碳) 标 记上一个氘 (分子量增加 1 Da), 进一步通过高分辨质 谱即可区分水解产生的D-氨基酸和原始的D-氨基酸。由于氨基酸为极性物质, 需要先对其进行非手性衍生 化以提高挥发性才能用 GC分析。主要的衍生化方法 有: 酯化、酰化和硅烷化等。其中, 硅烷化反应要求无 水环境, 反应条件苛刻, 且极易影响反应效率。氯甲酸 酯[9] 作为酰化试剂的一种, 具有反应快速和副产物少 等优点, 但其无法对氨基酸 (如Thr和 Ser) 侧链上的脂 肪族羟基衍生化, 因此导致这些极性较大的化合物难 以从色谱柱上洗脱下来。相比之下, 全氟酸酐不仅能使氨基酸 “ -碳上的氨基酰化, 还能衍生化氨基酸侧链的 羟基或氨基, 大大增加其挥发性。目前文献[9]报道中, 利用异丙醇 (isopropanol, IPA) 与三氟乙酸酐 (trifluo- roacetic anhydride, TFAA) 分别进行酯化和酰化的两 步衍生化方法具有较好的对映体分离度和灵敏度, 在 Chirasil-L-Val 柱上最多可成功分离 15 对D/L- 氨基酸 的N(O,S)-三氟乙酰基异丙酯衍生物, 因此是本文的主 要衍生化试剂组合候选对象。 由于合成多肽药物中含有不同氨基酸, 各氨基酸 的侧链结构不同, 其化学性质也具有较大差异, 因此针 对常见氨基酸建立 GC-MS 分析方法具有较大难度。目前该方法待改进之处在于: ① Trp、Arg和His等具有 较高分子量和极性的氨基酸可能在柱上无限期地保 留[10] ; ② Asp、Glu、Ser、Thr和Tyr等氨基酸侧链中含有 羟基, 可能影响其衍生化效率和衍生产物的稳定性[9] ; ③ 现有文献中 GC-MS定量方法未曾应用于氘代水解 的氨基酸产物, 其定量离子和方法专属性有待研究。本文采用的基于 IPA和 TFAA衍生化的氨基酸测定方 法是对文献[9, 11- 14]方法的改进 (氨基酸衍生化反应通式 如图 1所示), 通过正交设计优化多步衍生化反应中的 试剂用量、反应温度和时间等条件提高氨基酸衍生产 物的衍生化效率和稳定性; 通过增加第三步操作使氯 甲酸异丁酯 (isobutyl chloroformate, IBCF) 与 His侧链 上的咪唑环衍生化, 减弱其极性而得以分析, 最终该方 法可以在较短时间 (29 min) 内同时测定 17 种氨基酸 (除 Asn、Gln 和 Arg) 。采用氘代盐酸对胸腺法新进行 水解, 对文献[10, 15] 报道的定量离子方法进行调整和优 化。由于胸腺法新中含有的Asn会在酸水解和衍生化 过程中转化为 Asp, 因此对胸腺法新中其他 9 种氨基 酸 (Ala、Asp、Glu、Ile、Leu、Lys、Thr、Val、Ser) 进行分 析, Asn 以 Asp 结构计算 。由于胸腺法新不含 His, 因 此对氘代酸水解得到的氨基酸进行 IPA和 TFAA两步 衍生化处理, 建立胸腺法新中D- 氨基酸的定量方法, 并对方法进行了方法学验证 。采用已优化及验证的 GC-MS 方法对 6 家企业生产的胸腺法新原料药中D- 氨基酸含量进行准确测定。本实验从氨基酸层面反映 对映体纯度, 为胸腺法新的质量控制提供新的方法, 有 望为合成多肽药物全面控制消旋肽杂质提供参考。 图片 材料与方法 仪器与材料 7890A/5975C气相质谱联用仪 (美国 Agilent公司); 离心机 (美国 Eppendorf公司); MS-204S 电子天平 (瑞士Mettler Toledo公司); Milli-Q型超纯水 仪 (美国Millipore公司); 烘箱 (德国Memmert公司)。 氨基酸对照品: D-亮氨酸和D-赖氨酸对照品; D-异亮氨酸 对照品; L-半胱 氨酸对照品购自国药集团化学试剂有限公司; 其他 L- 氨基酸对照 品和 D- 氨基酸对照 品 (Merch KGaA, Darmstadt, 德国), 氨基酸批号信息见表 1; DCl (35%, 批号: MBBC4507)、D2O (批号: MKCG0822)、TFAA (批 号 : BCBZ4625)、三氟乙酸乙酯 (ethyl trifluoroacetate, TFAEt) (批号: MKCC4812) 和十二烷酸甲酯 (99.95%, 批 号 : BCBF7114V) 均购 自 Merch KGaA (Darmstadt, 德国); 盐酸 (HCl)、IBCF (批号: 80025282) 购自国药集 团化学试剂股份有限公司; 色谱纯二氯甲烷 (CH2Cl2) (Thermo Fisher Scientific, 美 国); 色谱纯 IPA (Anaqua Chemicals Supply, 美国) 。6批胸腺法新原料药含量均 为 100%, 自编号 1～6分别对应企业A(批号: 171001)、 企业B (批号: S00620171201)、企业C (批号: 1711012)、 企 业 D ( 批 号 : THSA141101-R)、企 业 E ( 批 号 : 0281711001) 和企业F (批号: C109-A-6180101)。 图片 色谱和质谱条件 CP-Chirasil-L-Val: N-丙酰基-L- 缬氨酸-叔丁基酰胺聚硅氧烷WCOT熔融石英毛细管 柱 (25 m×0.25 mm ID, 涂膜厚度 0. 12 μm, 美国Agilent 公司); 载气: 高纯氦气; 分流比 1∶50; 流速 1.0 mL ·min- 1 ; 进样量 1.0 μL; 进样口温度: 200 ℃ ; 柱温: 程序升温, 初 始温度 98 ℃ , 维持 8 min, 以 8 ℃ ·min- 1 升温至 170 ℃ , 维持 0 min, 以 10 ℃ ·min- 1 升温至 190 °C, 维持 10 min。离子源: 电子轰击源 (EI); 电子能量 70 eV; 离子源温 度: 230 ℃ ; 四极杆温度: 150 ℃ 。采集方式: 选择离子 扫描 (SIM), 定量离子见表2。 图片 数据处理 通过 GC-MS Advanced software (美国 Agilent公司) 获得各氨基酸衍生产物的提取离子流图(EIC), 并对各待测化合物的峰响应值进行记录, 采用 公式 (1) 进行定量分析。 图片 式 (1) 中AD 为样品溶液中各D- 氨基酸的峰值响 应, AL 为样品溶液中对应L-氨基酸的峰值响应, AD* 为 水解中由L-氨基酸外消旋化产生的D-氨基酸的峰值 响应。 氨基酸对照品溶液制备 精密称取各氨基酸对照 品约 10 mg于 50 mL量瓶, 加水溶解并定容至刻度, 即 得 。内标溶液: 适量称取十二烷酸甲酯, 用 CH2Cl2 配 成2 mg ·mL- 1 溶液 供试品溶液制备 氘代盐酸溶液: 精密量取 35% DCl 与 D2O 以 1∶1 (v/v) 混合即得, 随配随用 。取胸腺 法新原料药约 1 mg加入氘代盐酸溶液 350 μL溶解, 充 氮, 密封, 置 110 ℃烘箱放置20h, 放冷, 用氮气流吹干 过量试剂, 进行衍生化反应。 衍生化反应方法 取 1～2 mg供试品水解物或氨 基酸对照品, 加 DCl/IPA 溶液 (1∶5, v/v) 250 μL, 置于 110 ℃酯化反应 50min 。冷却后开盖, 用氮气流吹干 过量试剂 。加 TFAA/TFAEt 溶液 (1∶1, v/v) 250 μL 溶 解产物, 置于 130 ℃酰化反应 20min 。冷却后用氮气 流吹干过量试剂 。His 需要进行第三步衍生化, 即加 IBCF 100 μL 溶解产物, 置于 120 ℃酰化反应 20 min。冷却后用氮气流吹干过量试剂, 用适量 CH2Cl2 复溶最 终产物, 转移至进样小瓶, 进样。 衍生化条件的优化 正交设计考察DCl/IPA酯化 试剂中不同用量比例 [250 μL ( 1∶5, v/v)、250 μL ( 1∶2, v/v)、400 μL ( 1∶2, v/v)]、酯 化 反 应 温 度 (90、100、 110 ℃)、酯化反应时间 (20、30、50 min)、TFAA/TFAEt 酰化试剂用量 (80∶160、100∶200、125∶125 μL)、酸酐酰 化反应温度 (100、110、130 ℃ )、酸酐酰化反应 时 间 ( 10、20、30 min)、第三步酰化反应试剂及用量 (IBCF 50 μL、IBCF与CH2Cl2 各 50 μL、IBCF 100 μL)、IBCF酰 化反应温度 (100、110、120 ℃) 和 IBCF 酰化反应时间 ( 10、15、20 min) 对衍生化效率的影响。 供试品复溶试剂体积的优化 参照胸腺法新中各 L-氨基酸的摩尔比关系, 分别配制L-氨基酸储备液 (L- Ser、L-Glu、L-Thr、L-Ala、L-Val、L-Ile、L-Leu、L-Lys和L- Asp 浓 度 分 别 为 7. 11、14.20、7.08、7.09、7.09、2.37、 2.40、9.45 和 9.47 mmol ·L- 1) 和 D- 氨基酸储 备 液 (D- Ser、D-Glu、D-Thr、D-Ala、D-Val、D-Ile、D-Leu、D-Lys 和D-Asp 浓度分别为 1.41、2.84、1.42、1.42、1.42、0.48、 0.47、1.89和 1.90 mmol ·L- 1) 。取D-氨基酸溶液适量, 加 入到L- 氨基酸溶液中, 分别配成各D- 氨基酸浓度为0.25%、0.50%、1.00%和2.00%的混合氨基酸对照品溶 液, 每个样品平行制备 3份衍生物, 以D-氨基酸的平均 回收率为指标, 单因素考察复溶样品的溶剂 (CH2Cl2) 体积 (1、2、5、10、20、30 mL) 对各氨基酸衍生物平均回 收率的影响。 方法学考察 系统适用性 将混合氨基酸对照品溶液, 按上述 方法操作, 制备衍生产物, 加入内标溶液 50 μL, 连续重 复进样 6 次, 记录各氨基酸衍生物和内标物的响应值 比值Aaa/AIS, 并计算RSD。 线性关系和定量限 将混合氨基酸对照品的衍生 产物稀释成一系列梯度溶液以衍生物峰的响应值 (Y) 及相应的浓度 (X) 进行线性回归。以各化合物的信噪 比为 3计算检测限 (LOD), 以信噪比为 10计算定量限 (LOQ)。 精密度 取胸腺法新原料药按上述方法操作制备 供试品衍生产物, 平行6份, 其中一份连续进样6次, 按 上述方法测定, 记录各衍生物峰响应值, 按公式 (1) 计 算D-氨基酸含量及其RSD。 准确度 按“供试品复溶试剂体积的优化”操作配 成 CD/(CD+CL) 浓度比为 0.25%、0.50%、1.00%和 2.00% 的氨基酸对照品溶液, 按上述方法操作制备混合对照品 衍生产物, 按上述方法测定, 每个浓度平行3份, 计算对 照品平均回收率。 加标回收率 取胸腺法新原料药氘代盐酸水解产物 加入混合氨基酸对照品, 使各待测D-氨基酸的最终含量 为 0.50%～1.00%, 按上述方法操作制备供试品衍生产 物, 平行6份, 按上述方法测定, 计算平均加标回收率。 结果 1 衍生化条件优化 综合极差分析结果和单因变量的多因素方差分析 结果, 得到适用于 17种氨基酸衍生化反应的整体最优 因素水平分别是: 第一步酯化反应试剂为250 μL DCl/ IPA ( 1∶5, v/v)、酯化反应温度为 110 ℃、酯化反应时间 为 50 min; 第 二 步 酰 化 反 应 试 剂 为 250 μL TFAA/ TFAEt溶液 (1∶1, v/v)、酰化反应温度为 130 ℃、酰化反 应时间为 20 min; 仅针对 His 的第三步酰化反应试剂 为 100 μL IBCF溶液、酰化反应温度为 120 ℃、酰化反 应时间为20 min。 2 供试品复溶试剂体积的优化 结果表明, 各氨基酸衍生物的平均回收率随着 复溶样品的溶剂体积的变化而变化, 且每种浓度的样 品得到的测定结果RSD (n = 3) 均小于 10.42% 。其中, D-Ala、D-Ile和D-Ser在 CH2Cl2 体积为 1 mL时, 可以得 到最佳的平均回收率范围为 80.78%～128. 18%; D-Val、 D-Leu和D-Glu在CH2Cl2 体积为2 mL时可以得到最佳 的平均回收率范围为77.75%～125.48%; D-Thr在CH2Cl2 体积为 5 mL 时可以得到最佳的平均回收率范围为 81.88%～99.93%; D-Asp 在 CH2Cl2 体积为 10 mL 时可 以得到最佳的平均回收率范围为 76.69%～105.01%; D-Lys在 CH2Cl2 体积为 30 mL时可以得到最佳的平均 回收率范围为 80.65%～96.32% 。这是因为多步衍生化 的最后一步氮气吹干后, 复溶样品所用的 CH2Cl2 体积 决定了样品中L-氨基酸的进样浓度, 而数据处理的公 式 (1) 不仅与D-氨基酸含量有关, 还与L-氨基酸终浓度 有密切的联系, 因此为准确测定胸腺法新中不同D-氨 基酸含量, L-Ala、L-Ile、L-Ser、L-Val、L-Glu、L-Leu、L- Thr、L-Asp 和L-Lys 最佳的进样浓度分别为 1 011.25、 335.96、1 009. 17、507.01、1 006.97、171.2、201.3、133.96 和44.71 μmol ·L- 1。 3 方法学验证 3.1 专属性 在上述色谱和质谱条件下, 16对D/L-氨 基酸和 Gly 在 29 min 内实现基线分离 。由于 Chirasil-L-Val色谱柱的手性材料中L-缬氨酸的空间构型使与 其手性中心相连的二酰基结构和待测L-氨基酸上的羰 基形成更强的分子内氢键, 从而导致L-氨基酸衍生物 在色谱柱中的保留时间延长, 因此D-氨基酸衍生物在 相应的L-对映体之前出峰[16, 17], 见图2 。系统适应性实 验结果显示各氨基酸衍生物的相对标准偏差 RSD< 6.97%, 表明方法的系统适用性良好 。各氨基酸衍生 物的分子质量、保留时间、定量离子和定性离子信息见 表2 。由于Gln和Asn在衍生和水解反应中会完全水解 成Glu和Asp, 而Arg侧链上胍基的氮无法全部被TFAA 或 IBCF 酰化, 分子极性大且沸点高, 因此无法检测 Gln、Asn和Arg衍生产物。 图片 3.2 线性关系和定量限 结果显示, 在设计的进样浓 度范围内各化合物线性关系良好, r2 均大于 0.992 3。各氨基酸衍生物的检测限和定量限范围分别为0.05~ 1.40 μmol ·L- 1 和 0.09～2.79 μmol ·L- 1, 表明该方法灵敏 度良好。结果见表3。 图片 3.3 精密度 实验表明, 6 份供试品溶液中 9 种D-氨 基酸峰测定结果的RSD均小于 10.90%, 连续重复进样6针的结果RSD均小于10.43%, 表明方法的精密度良好。3.4 准确性和加标回收率 对照品准确性实验结果表 明, 各氨基酸得到的平均回收率为 76.69%～128. 18%, 且每种浓度的样品测得结果的 RSD (n = 3) 均小于 10.42% 。其中, Ala、Ile、Val、Leu、Thr 和 Glu 适用的D- 氨基酸浓度范围为 0.50%～2.00%; Ser 适用的D-氨基 酸浓度范围为 1.00%～2.00%; 而 Asp 和 Lys 由于定量 限较低, 因此可准确检测的D-氨基酸浓度低至 0.25%, 综上说明大多数D-氨基酸在 0.50%～2.00% 浓度内的 回收率良好。加标回收实验结果表明, 胸腺法新原料药 中9种D-氨基酸的平均加标回收率为70.41%～125.39%, RSD 在 2. 15%～10.91% 之间, 说明该方法在 0.50%~ 1.00%浓度范围内测定的准确度良好。 4 样品测定 检测 6 批不同厂家的胸腺法新原料药, D-Asp 和 D-Glu含量较高, 分别为0.41%～0.49%和0.25%～0.33%, 其他D-氨基酸响应值比值均小于0.25%, 结果见表4。 图片 讨论 本文建立了多步衍生化 GC-MS 法测定胸腺法新 中 9种D-氨基酸含量的方法, 具有如下优点: ① 衍生 化效率较高且衍生产物稳定, 极大缩短分析时间, 在 29 min内 16对D/L-氨基酸和Gly实现基线分离; ② 氨 基酸对映体测定种类增加至 17种; ③ 可用于胸腺法新 中D-氨基酸含量测定, 且重复性、精密度及回收率等 良好, 相比HPLC法, 该方法无需合成消旋肽杂质对照 品, 能快速反映胸腺法新中非预期氨基酸对映体含量。 多步衍生化反应条件优化是手性氨基酸定量分析 的关键因素 。本实验以 17 种氨基酸衍生产物与内标 的峰值响应比值为指标, 对多步衍生化反应的反应试 剂用量、反应温度和反应时间等进行正交设计实验考 察, 得到整体最优的衍生化反应条件。当氨基酸个别 因素的最佳水平不完全与预选方法组合相同时, 进一 步通过方差分析验证了在该预选方法组合条件下, 所 有显著性影响 (P<0.05) 各氨基酸衍生效率的关键因 素均处于最佳水平, 而个别氨基酸未满足最佳水平的影 响因素恰好为非关键因素 (P>0.05), 对衍生化效率影响不明显, 因此该整体最优反应条件组合适用于 17种氨 基酸衍生化。通过对色谱和质谱条件优化, 在 29 min 内实现了各氨基酸对映体的有效分离; 为了实现原始 存在和水解过程产生D-氨基酸的区分, 本实验采用了 氘代盐酸水解并基于定量离子结构式包含 “ -碳及其上 氢离子的原则调整了 17种氨基酸的定量离子; 同时对 胸腺法新供试品复溶体积进行优化, 对已优化的方法 进行线性、定量限、精密度、准确性和加标回收率等方 法学考察, 验证了定量方法准确可靠。 本方法成功应用于对胸腺法新中 9 种D 型氨基 酸的定性和定量测定, 发现各厂家产品的D型氨基酸 含量趋势一致, 其中D-Asp 和D-Glu 含量较高 。虽然 ChP2015 仅列出常见的 [D-Ser1-胸腺法新] 杂质结构, 但实验结果表明胸腺法新原料药还可能存在含其他 D-氨基酸的消旋肽杂质。该结果提示, 厂家在生产过 程中应关注以上D-氨基酸存在的原因, 进一步考察氨 基酸原料药纯度或合成工艺的影响因素。 免责声明：本文为行业交流学习，版权归原作者所有，如有侵权，可联系删除。 |
回复此楼» 猜你喜欢
一个审稿人已返回，也没邀请审稿人，也没人审稿中，编辑要闹啥？
已经有12人回复
-
蹲一个男朋友
已经有20人回复
-
有博导缺学生吗，我可以当牛做马
已经有56人回复
-
申请基金代表性成果
已经有10人回复
-
来用亲身体会，一起说说年轻老师的辛苦
已经有19人回复
-
有知道工材e01情况的吗？
已经有12人回复
-
基金委也是打工的
已经有19人回复
-
执念
已经有6人回复
-
南林海归博士首聘期 没拿到国自然，被降级后自杀
已经有34人回复
-
求助：医生想润
已经有7人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
深圳大学医学部肿瘤药理研究课题组招聘研究员/副研究员/博士后/研究助理
+1/123
-
威格手套箱助力新型光伏材料研究案例
+1/88
-
90后男北京真诚征婚 (征到即删，长期有效)
+1/88
-
广西科学院-合成生物学创新团队-长期招聘博士（安家费+事业编）
+1/87
-
48万年薪-东莞理工半导体信息材料与器件联合武大、华科与华南理工等诚聘博士后
+1/85
-
中国科学院过程工程研究所怀柔中心 招聘化工冶金方向实验员（大中专或本科，背景优先�
+1/38
-
寻求 项目 论文 合作
+2/20
-
青岛农业大学植物医学学院蔬菜病害成灾机制与绿色防控课题组科研助理招聘启事
+2/20
-
中山七院诚聘博士后（组织微环境调控/类器官芯片方向）
+1/9
-
征对的人结婚
+1/8
-
中科院地理所客座研究生招聘
+1/7
-
大湾区微生物发酵CRO服务、发酵小中试基地
+1/7
-
招聘农药检测分析工程师
+1/6
-
两年超100万！温医大谢聪颖教授/同济大学胡勇教授联合培养“医工交叉”博士后
+1/5
-
两年超100万！温医大谢聪颖教授/同济大学胡勇教授联合培养“医工交叉”博士后
+1/5
-
两年超100万！温医大谢聪颖教授/同济大学胡勇教授联合培养“医工交叉”博士后
+1/3
-
关于电解液中溶剂化作用或者氢键相互作用对羧酸盐红外峰的偏移
+1/2
-
中科院博士后、研究助理招聘公告；分子诊断公司研发人员招聘公告
+1/1
-
24博士申请
+1/1
-
中科院博士后、研究助理招聘公告；分子诊断公司研发人员招聘公告
+1/1
+1/123
简单回复
tzynew2楼
2023-04-29 11:08
回复
专注多肽(金币+1): 谢谢参与
nono20093楼
2023-04-30 11:26
回复
专注多肽(金币+1): 谢谢参与
·
2023-04-30 12:37
回复
专注多肽(金币+1): 谢谢参与
