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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】cDNA一直反转录不成功。
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lilu198409

金虫 (小有名气)
★
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呵呵 鄙人也是刚学不久 提RNA的效果跟材料也有关系 一般Trizol都可以提出来吧
我师姐的材料也是常规提不出来 用百泰克提 效果很好  不过价格很贵 50次要1500吧
Trizol试剂貌似最近水货比较多 我们上次就有一瓶假货 大家都提个半死提不出来
反转录好像一般都不会出什么问题
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11楼2009-09-29 22:49:15
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蓝皮鼠7983

至尊木虫 (文坛精英)

飞过蓝天
Trizol Trizol抽提试剂
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海到尽头天做岸，山登绝顶我为峰。
12楼2009-09-30 00:21:03
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caicaiyy

铜虫 (小有名气)
我用Trizol法提的，效果不错，提完RNA检测后立即反转入。反转入时要加点RNASE抑制剂。
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13楼2009-10-08 11:15:33
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jjlbest

木虫 (著名写手)
★
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我们一直用TRIzol提的RNA ，质量都不错，至于反转录我们用的是Takara的试剂盒只需要十五分钟，很节省时间，并且一次也没有失败过，建议试试！
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14楼2009-10-08 13:00:16
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lmj2029

金虫 (小有名气)
★
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最重要是养成良好的实验习惯，一般都不会降解
当然，必要的实验条件还是要的
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15楼2009-10-09 08:30:47
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刘仕博

金虫 (著名写手)
★
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我之前提前cDNA的时候也总不成功，不过最近和别人学习了一个方法，挺好。
1.降样品在trazol中充分研磨。
2.加入0.2ml chlorform
3. 室温放置10分钟，期间不断用手晃动使其充分接触。
4. 在4°C，12000xg条件下离心分离15分钟。
5.取上清液于新e-tube中，加等量isopropanol,手摇使其混合。
6.室温放置10分钟，在4°C，12000xg条件下离心分离10分钟。
7.加1ml70%eth洗涤后在4°C，12000xg条件下离心分离5分钟。
8.将液体倒掉放置其干燥后加DEPC水。
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生命在于折腾~
16楼2009-11-12 20:04:06
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