24小时热门版块排行榜    

查看: 2197  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

695

木虫 (职业作家)

[交流] 测序关于碱基的确定 已有1人参与

现在我的RACE基本就快确定了,序列也拼接的差不多了,但是现在遇到两个碱基差异的问题,还望有经验的虫友多多指教!

具体问题是,在我的overlapping fragment上,有两个碱基与我的5RACE产物测序不一致,具体表现在1.多出了一个碱基C;2.原有CDS序列上是T,而我的测序显示为C。但是我的3RACE测序与已发表的CDS序列是一致的,这里附上测序结果,望大家相助,看我该如何定夺,还是继续在多加测序,不甚感激!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vickystt

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果不用做RACE的试剂盒,用哪种酶的效果会好一点?
8楼2011-03-15 15:34:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

gastrodia

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你看看蛋白的序列有没有变,如果蛋白的序列没有变,碱基出现替换是很正常的,此外RACE拼接的结果序列不正确是很正常的,你可以通过RACE的信息设计扩增cDNA的引物,用高保真酶进行PCR,得到cDNA后克隆测序,以此序列为准,文章上都这样
2楼2009-09-24 20:35:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

annwt

木虫 (正式写手)

测序本身也是PCR反应,
建议多测几回,换个测序方向。
3楼2009-09-24 21:17:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
从峰图上可以看出碱基的峰很明显,应该不是测错了或者拼接错了。建议用像如Kod这样的高保真酶重新PCR,测序。
4楼2009-09-26 00:05:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +8 yuleib84 2026-08-25 9/450 2026-08-25 15:23 by Weed114114
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 +4 ziyangfang 2026-08-25 6/300 2026-08-25 15:07 by huagongfeihu
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +19 羊腰板 2026-08-21 22/1100 2026-08-25 10:38 by popular289
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 明天应该可查了!? +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
信息提示
请填处理意见