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雨后郁金香

金虫 (小有名气)

[交流] 关于大片段基因的引物设计

本人现在需要设计一个基因的引物,基因有12000多bp,现需设计一对引物,要求PCR产物的大小为2KB~5KB,将该基因的12000多bp序列导入Primer 后,会弹出个对话框,写着:“more than 30000 possible primers. Optimal primers search will be exceedingly time consuming.Please reduce anti-sense primer search range。”想请问各位有什么更好的设计引物的方法来获得该基因啊??  谢谢达人。。。
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

这么长的序列,就通过一次PCR、设计一对引物是不可能拉出来的吧?再说就算是拉出来了,按照Taq 千分之2~3的错配率,会有24-36个错配......
建议设计3-4对引物,分别拉,再把各个片段连起来。
11楼2009-09-23 22:39:08
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