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yidaqunyan木虫 (正式写手)
博士
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[交流]
请教关于测序结果的问题
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最近在P丝状真菌的一个基因，开始根据蛋白比对设计的简并引物，由于特异性不强P出来N多条带，测序，比对发现和其他真菌基因相似性只有39%左右。而其它真菌之间比对在47%左右。我不知道相似性达到多少才算成功。。 然后我干脆找了和该菌亲缘关系比较近的真菌直接设计了特异性引物，也是P出来N多条带，本来目标片段的长度应该是1500bp，在400bp左右有一最亮条带，回收后测序，测序结果发现和其他真菌基因相似性也只有40% 是不是我两次PCR都失败了？ 郁闷死了，已经做了几个月了，不知道该怎样进行下去了，现在已经公布的该基因的全序列和我做得亲缘关系最近的只有同属于曲霉科的黑曲霉。 请求各位老师帮助。。 PS：我是直接以DNA为模板，有老师说要用mRNA,是一定要用mRNA吗？难道我从一开始就错了？ [ Last edited by yidaqunyan on 2009-9-22 at 14:36 ] |
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