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关注｜霍乱在全球多国零星暴发
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近日的热搜被“霍乱”这个古老的传染病承包了。7月9日，武汉大学出现一例感染性腹泻病例，经省市区三级疾控中心复核诊断为霍乱，13日武汉一家水产品市场售卖的甲鱼，检出4份霍乱弧菌阳性。 在世界范围内，阿富汗20人死亡，印度5人死亡，索马里16人死亡，喀麦隆154人死亡……这一串沉重的数字，是今年在霍乱疫情中逝去的生命。 那么啥是霍乱？会传染吗？霍乱弧菌又是什么？怎么检测呢？跟着小乐一起来了解一下。 1、什么是霍乱 霍乱是因摄入的食物或水受到霍乱弧菌污染而引起的一种急性腹泻性传染病。每年，估计有300万～500万霍乱病例，另有10万～12万人死亡。病发高峰期在夏季，能在数小时内造成腹泻脱水甚至死亡。 2、霍乱的传播途径 被污染的水源及海产品都可以作为传播途径。剧烈腹泻往往对人体造成较大危害，会出现脱水等症状。 霍乱不会通过空气传播，也不能通过皮肤直接传播，主要经过消化道途径进行传播，也就是经过粪口途径传播。例如手接触到感染了霍乱弧菌的东西后没有洗手就直接拿东西吃，或者与霍乱确诊患者同食，那就有可能出现感染。 因此霍乱的传染源分为两类：第一类是具有典型临床表现的霍乱患者，其排泄物及呕吐物中都含有大量的霍乱弧菌，由于频繁的腹泻和呕吐，可以污染周围环境，导致水源食物被污染。 第二类是带菌者，指没有典型的临床表现，但是粪便中带有霍乱弧菌的人，包括潜伏期带菌、恢复期带菌以及健康带菌，这几类人群由于没有症状而没有被隔离，反而可以带菌到处活动成为传染源。 3、感染霍乱后有哪些症状？ 大多数情况下，感染只造成轻度腹泻或根本没有症状，典型的症状表现为剧烈的无痛性水样腹泻，严重的一天腹泻十几次。感染霍乱后，如果治疗不及时或不恰当，会引起严重脱水导致死亡。 4、什么人容易感染霍乱？ 人群普遍易感，胃酸缺乏者尤其易感。 5、什么时候容易得霍乱？ 我国的流行时间为3至11月份，6至9月份是流行高峰。 6、霍乱的潜伏期和传染期多少？ 潜伏期数小时至5天，通常2至3天。粪便阳性期间有传染性，通常至恢复后几天。偶有携带者传染期持续数月。对霍乱弧菌有效的抗菌药物可缩短传染期。 7、霍乱弧菌是什么？ 霍乱弧菌（V.cholera）是人类霍乱的病原体。霍乱弧菌属于弧菌科，革兰氏阴性菌。生态环境位于沿海水域和河口，通常与浮游动物和贝类有关。 目前，根据“O”抗原的变异，已鉴定出超过 200 种霍乱弧菌 ，大多数霍乱弧菌菌株不致病。到目前为止，只有属于血清群 O1 和 O139 的菌株与流行性霍乱有关。 大多数的疾病暴发由O1型霍乱弧菌引起，而1992年首次在孟加拉国确定的O139型仅限于东南亚一带。非O1非O139霍乱弧菌可引起轻度腹泻，但不会造成疾病流行。近几年，在亚洲和非洲的一些地区发现了新的变异菌株。据观察认为，这些菌株可引起更为严重的霍乱疾病，死亡率更高。 霍乱弧菌存在于水中，最常见的感染原因是食用被患者粪便污染过的水。霍乱弧菌能产生霍乱毒素，造成分泌性腹泻，即使不再进食也会不断腹泻，洗米水状的粪便是霍乱的特征。 8、霍乱弧菌的形态 新从病人分离的霍乱弧菌比较典型，为革兰氏阴性菌，菌体弯曲呈弧状或逗点状，菌体一端有单根鞭毛和菌毛，无荚膜与芽胞。经人工培养后，易失去弧形而呈杆状。取霍乱病人米泔水样粪便作活菌悬滴观察，可见细菌运动极为活泼，呈流星穿梭运动。在液体培养基内常呈单个、成对成链状，有的相连呈S形，甚至螺旋状。 9、霍乱弧菌的检测方法 目前用于霍乱弧菌检测的方法主要有微生物学方法、分子生物学方法和免疫学方法。 微生物学检测方法 目前，霍乱诊断在疾病暴发管理中的黄金标准仍然是通过选择性培养基从粪便样品中分离出细菌，然后进行生化鉴定和血清分型。 霍乱弧菌营养要求不高，在普通培养基上即可生长良好，在碱性蛋白胨水中生长迅速，因此常以其作为选择性增菌培养基。用选择性培养基，如 TCBS 琼脂进行分离，在 TCBS 上直径 2–4 mm 的有光泽的菌落可被认为是霍乱弧菌，大约需要8天才能确认是否为霍乱病例。并且这些可疑的菌落还需生化试验证实，然后进行血清群确认，并确定抗生素耐药性 ，或通过使用开发用于靶向基因组DNA的O1和O139的引物进行PCR，从而对结果进行综合评定，由此可判断是否为霍乱弧菌。 微生物学检测方法灵敏度和特异性较好，但其检测耗时长、工作量大，且易受环境、培养条件及操作人员主观因素等条件影响，不能满足疾病防控快速反应体系的需求，不利于临床快速诊断。 免疫学诊断方法 该法主要是以霍乱毒素( CT) 为目的抗原，以单克隆抗 CT 抗体为反应素， 通过致敏乳胶颗粒或酶标记物、胶体金标记物快速检测 CT 的一系列免疫学试验。这些试验的敏感性、特异性以获得高效价和高特异性的抗 CT 抗体为基础，包括乳胶凝集试验 ( RPLA) 、酶联免疫吸附试验( ELISA) 、胶体金免疫层析等。检测前通常先将待检霍乱弧菌菌株在 CAYE、AKI 等培养基中培养，促进毒素基因的表达以提高检出率。 免疫学诊断方法由于检测用的抗体获取不易，活性易降低储存较难，弧菌科存在抗原交叉性且霍乱弧菌本身的生物学特性———存在抗原变异现象，致使结果准确性不够，这是导致很多免疫学快速检测方法至今仍难以广泛使用的主要原因。 分子生物学检测方法 以聚合酶链式反应(PCR)为代表的分子生物学检测方法，在近几十年发展迅速。 1987 年，PCR 的发明实现了细菌高灵敏度的检测。因为它通过放大目标而不是信号来检测生物体，因此不太容易产生假阳性。目标 DNA 可在不到 1 h 内扩增 100 万倍，理论上灵敏度可达到检测单一目标病原体。PCR 因具有简单、快速、敏感、特异性强等优点，在病原微生物包括霍乱弧菌的检测应用中已较为广泛。方法上有双重PCR、多重 PCR、巢式 PCR，扩增的目标基因分两类:毒力基因如 ctxA、ctxA2 － B、tcpA、tcpB、ace 等; 种特异性基因 rtxA、epsM、mshA、ompW、O1 和 O139 群特异的 rfb、zot 等。最常用的 PCR 主要是针对 ctxA、tc-pA 的检测。 目前，传统选择性培养基分离培养鉴定法仍是霍乱弧菌检测的主要方法，先增菌培养后结合生化及血清学方法进行鉴定，这种方法虽然检测结果准检测目标单一且耗时长等缺点，为实现霍乱弧菌等致病菌的快速检测，技术人员建立了酶联荧光免疫检测法、胶体金确，但却存在操作烦琐、检测效率与检测灵敏度低、试纸条法、API 生化鉴定试纸条法、实时荧光聚合酶链式反应（PCR ）、环介导恒温扩增（LAMP）等方法。其中，实时荧光 PCR 及其他相关的改良方法如双启动寡核苷酸引物 - 聚合酶链式反应（DPO-PCR）法等以其灵敏度高、操作简便快捷等显著优势，近年来在霍乱弧菌等致病菌的检测中，得到越来越广泛应用 ，但是荧光检测相关设备存在售价偏高、引物探针设计要求较高、产物片段偏小等缺陷，在很大程度上限制了其推广应用，基层实验室及非实验室环境下现场检测的推广应用更是受到了极大限制。 重组酶聚合酶扩增技术是继LAMP之后的另一种等温核酸扩增技术，具有反应时间短、恒温实现核酸的解链和退火、检测结果易辨识等优点。 重组酶聚合酶扩增技术检测方法特异性强，灵敏度与普通 PCR 方法及LAMP方法相当，但重组酶聚合酶扩增技术检测方法相比普通PCR方法，反应更为快速，且该方法无需依赖PCR仪，更易满足基层单位和现场检测的需要。而相比于LAMP，重组酶聚合酶扩增技术的引物设计难度更小、产物片段单一，且便于后续进行测序确证，因而具有更高的使用价值。 RAPID技术平台可用于霍乱弧菌的现场快速检测，为霍乱弧菌的防控检测提供一种新的、可靠的技术支持。 |
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