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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教PCR体系问题
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
酶按照它的说明书加多少u就行了,量大了里面的甘油反而会影响酶活.
dNTP过高则不能扩增,过低将降低反应产物的产量.浓度一般为50-400 uM
镁离子过高,使反就特异性降低,过低则产物减少.当dNTP为200 uM时,镁一般为1.5mM较合适.
引物过高,会形成较多的引物二聚体,过少则产物减少
另外,退火温度也要注意,在Tm值允许的范围内,选择较高的退火温度可大大减少引物和模板间的非持异性结合,提高PCR的特异性.
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11楼2009-09-13 11:56:30
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