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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒DNA
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anik

银虫 (正式写手)
★
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你是用碱法提取的吧？
我以前用这种方法提取还从来没有像你这样的结果！！

加Solution II时只能轻轻倒转，切勿剧烈晃动。
你提的那些杂带不是RNA ，RNA没有那么大，应该是大肠杆菌的基因组DNA。
另外酶切不成功，有可能在氯仿那步你没有混入了氯仿，还有在用酒精洗涤时，究竟残留也影响酶切。
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11楼2009-08-27 17:51:01
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chenyuqin

新虫 (小有名气)
★
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1酶切条件合适不？
2超螺旋？如果有的话可以先高温变性2min,然后立即冰浴2min试试吧
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where there is a will,there ia a way.
12楼2009-08-28 17:22:31
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suzzan

银虫 (小有名气)
我是用试剂盒做的，没用氯仿，酶切是pst1，37°水浴一个小时啊，最亮的那条就是超螺旋吧，
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13楼2009-08-29 15:11:43
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baiyidao

金虫 (小有名气)
★
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再加入solution2震荡过了，应该上下颠倒5次就行啦。
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14楼2009-08-29 15:35:39
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csdyg

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先，质粒提取出现多条带属于比较正常，一般会有2、3条带，我看有文献指出，质粒电泳有可能出现7种条带，具体构型不太记得了。这时，一般如果用酚仿抽提一下，会发现条带减少。

另外，酶切问题可能性很多，适当增加酶量，延长酶切时间试一下。
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15楼2009-08-29 15:50:50
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suzzan

银虫 (小有名气)
恩，好的 ，我试试看 谢谢了。
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16楼2009-08-29 19:18:12
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melissaqin

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用质粒跑电泳，出现三条带是很正常的，这三条带是质粒的三种构象,分别是开环的,线性的,超螺旋。
你酶切的图，是单酶切嘛？你的目的片段和载体各是多大？图上的片段大小应该是你目的片段和载体大小之和吧！
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17楼2009-08-29 21:16:58
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suzzan

银虫 (小有名气)
酶切是单酶切的，是啊，那个最亮的就是超螺旋，目的片段大概是1000-5000bp吧，
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18楼2009-08-30 16:00:17
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)
★
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酶切没切开，很有可能就是质粒DNA质量不高，当然也有可能是溶解之前乙醇没有挥发干净
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
19楼2009-08-30 16:07:37
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suzzan

银虫 (小有名气)
我是用试剂盒做的，没有用到乙醇啊，试剂盒做完直接加酶，进行酶切了呀
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20楼2009-08-31 11:03:35
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