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anik

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你是用碱法提取的吧?
我以前用这种方法提取还从来没有像你这样的结果!!

加Solution II时只能轻轻倒转,切勿剧烈晃动。
你提的那些杂带不是RNA ,RNA没有那么大,应该是大肠杆菌的基因组DNA。
另外酶切不成功,有可能在氯仿那步你没有混入了氯仿,还有在用酒精洗涤时,究竟残留也影响酶切。
11楼2009-08-27 17:51:01
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chenyuqin

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1酶切条件合适不?
2超螺旋?如果有的话可以先高温变性2min,然后立即冰浴2min试试吧
where there is a will,there ia a way.
12楼2009-08-28 17:22:31
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suzzan

银虫 (小有名气)

我是用试剂盒做的,没用氯仿,酶切是pst1,37°水浴一个小时啊,最亮的那条就是超螺旋吧,
热爱生活,才会被生活所爱
13楼2009-08-29 15:11:43
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baiyidao

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
再加入solution2震荡过了,应该上下颠倒5次就行啦。
14楼2009-08-29 15:35:39
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csdyg

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
首先,质粒提取出现多条带属于比较正常,一般会有2、3条带,我看有文献指出,质粒电泳有可能出现7种条带,具体构型不太记得了。这时,一般如果用酚仿抽提一下,会发现条带减少。

另外,酶切问题可能性很多,适当增加酶量,延长酶切时间试一下。
15楼2009-08-29 15:50:50
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suzzan

银虫 (小有名气)

恩,好的 ,我试试看 谢谢了。
热爱生活,才会被生活所爱
16楼2009-08-29 19:18:12
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melissaqin

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用质粒跑电泳,出现三条带是很正常的,这三条带是质粒的三种构象,分别是开环的,线性的,超螺旋。
你酶切的图,是单酶切嘛?你的目的片段和载体各是多大?图上的片段大小应该是你目的片段和载体大小之和吧!
17楼2009-08-29 21:16:58
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suzzan

银虫 (小有名气)

酶切是单酶切的,是啊,那个最亮的就是超螺旋,目的片段大概是1000-5000bp吧,
热爱生活,才会被生活所爱
18楼2009-08-30 16:00:17
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
酶切没切开,很有可能就是质粒DNA质量不高,当然也有可能是溶解之前乙醇没有挥发干净
路漫漫其修远兮,吾将上下而求索
19楼2009-08-30 16:07:37
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suzzan

银虫 (小有名气)

我是用试剂盒做的,没有用到乙醇啊,试剂盒做完直接加酶,进行酶切了呀
热爱生活,才会被生活所爱
20楼2009-08-31 11:03:35
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