24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
查看: 2928  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

bio_linda

[交流] PCR退火温度已有2人参与

各位虫友大家好!
    我拿到的引物退火温度一个是69度,一个62度,PCR程序退火温度设多少合适呀?我做的梯度是从52到65的,低温时在2000和1500左右有微弱的条带(目的条带900左右),中间温度扩出来的在250到100之间有明亮的引物二聚体,高温没有任何条带。
    我想再重新p一次,请问大家,从这种结果看,我的退火温度取什么范围的梯度合适呀?还是要重新设计引物?
    O(∩_∩)O谢谢~~
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

向左转

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by rheliang at 2010-12-21 14:46:10
我一个基因P了很久,跟楼主情况类似,做了温度梯度,低退火温度(不高于50℃)有条带,高退火温度就没条带了,奇怪的是在低退火温度下P出来的大小符合目的基因的产物回收之后测序,测序结果不是希望得到的目的基因 ...

不知道这个问题解决没有,我目前也遇到这个问题,温度高了没有条带,温度低了有条带,然后我孩子改进程序。不知道后面测序会不会出现问题,求指导。。
15楼2015-09-02 17:26:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

sgba0307

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
没有出现过目的条带》?改变模板的浓度试试
2楼2009-08-13 19:39:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang6871

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这么情况我们也遇到过,不过没有这么高的Tm值。我们一般是取中间温度,比如你这对引物,取64摄氏度应该可以扩出来的,但是估计会有杂带出现的。
过于功利,浮躁,布满灰尘的心都是创新的杀手!多记,心静,多动手,贴近大自然!
3楼2009-08-14 01:03:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

genetics183

木虫 (正式写手)

应该避免两条引物Tm值相差太大。
士虽有学,而行为本焉。
4楼2009-08-14 09:12:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见