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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR退火温度
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bio_linda

[交流] PCR退火温度 已有2人参与

各位虫友大家好！
    我拿到的引物退火温度一个是69度，一个62度，PCR程序退火温度设多少合适呀？我做的梯度是从52到65的，低温时在2000和1500左右有微弱的条带（目的条带900左右），中间温度扩出来的在250到100之间有明亮的引物二聚体，高温没有任何条带。
    我想再重新p一次，请问大家，从这种结果看，我的退火温度取什么范围的梯度合适呀？还是要重新设计引物？
    O(∩_∩)O谢谢~~
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1楼 2009-08-13 19:09:56
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银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by rheliang at 2010-12-21 14:46:10
我一个基因P了很久，跟楼主情况类似，做了温度梯度，低退火温度（不高于50℃）有条带，高退火温度就没条带了，奇怪的是在低退火温度下P出来的大小符合目的基因的产物回收之后测序，测序结果不是希望得到的目的基因 ...

不知道这个问题解决没有，我目前也遇到这个问题，温度高了没有条带，温度低了有条带，然后我孩子改进程序。不知道后面测序会不会出现问题，求指导。。
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15楼2015-09-02 17:26:08
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sgba0307

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没有出现过目的条带》？改变模板的浓度试试
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2009-08-13 19:39:26
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zhang6871

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这么情况我们也遇到过，不过没有这么高的Tm值。我们一般是取中间温度，比如你这对引物，取64摄氏度应该可以扩出来的，但是估计会有杂带出现的。
赞一下(1人) 回复此楼
过于功利，浮躁，布满灰尘的心都是创新的杀手!多记，心静，多动手，贴近大自然!
3楼2009-08-14 01:03:51
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genetics183

木虫 (正式写手)
应该避免两条引物Tm值相差太大。
赞一下 回复此楼
士虽有学，而行为本焉。
4楼2009-08-14 09:12:44
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