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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接转化的时候，去磷酸化吧什么都不长，不去磷酸化吧长不少全自连
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天使的茶

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by fengxueren at 2021-02-18 00:19:39
为何不考虑双妹切连接

和老板提过了，她就说她做了那么多年吧啦吧啦的，超无奈
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无
11楼2021-02-18 02:01:57
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lllilei1986

新虫 (小有名气)
说明你酶切有问题啊，去磷酸后不自连，不去磷酸化自连，说明你没有切完全，就是有单酶切在里边，另一个酶没切开，你是那两个酶，如果共用Buffer有个效率低的，我建议你先单酶切他，然后回收后在切另一个酶，根本不需要去磷酸化，转化没问题，前提要保证片段也酶切好了。
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12楼2021-02-18 11:17:04
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KM石头

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

要不先不加酶将载体与片段50度孵育20分钟，冷却下来后加酶连接
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13楼2021-02-19 14:20:49
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HK驱魔者

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 天使的茶 at 2021-02-14 10:55:12
对啊，只能自己做了，而且只能不断重复。。...

楼主怎么样了，连上了吗？要不换个快切酶，和连接酶试试

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14楼2021-03-20 22:45:06
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