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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 无机/物化 » 请教有关荧光发射光谱！
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chemosensor

金虫 (小有名气)

recomend a willey book?

引用回帖:
Originally posted by cnmaomao at 2005-12-1 06:44 PM:
最近做荧光发射光谱，发现当用254nm做激发波长时获得的荧光发射光谱竟然在254nm附近有发射峰，请教这是为什么？

Molecular fluorescence
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sensor
11楼2006-01-12 13:09:20
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lwx20212

金虫 (小有名气)
★
huyuchem(金币+1):鼓励
在做荧光光谱时，在激发波长和激发波长整数倍的地方都会有瑞利散射，在激发波长几个纳米后还会有一个较弱的拉曼散射峰。判断的方法是改变激发光波长，两个散射峰会随着激发光波长的改变而改变，你真正的荧光峰只会发生强度的改变，峰位置不会有改变。
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12楼2006-01-13 09:21:24
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soaring0331

金虫 (正式写手)

纠正错误

★
huyuchem(金币+1):早该出手嘛！呵呵。谢谢！
引用回帖:
Originally posted by sangdy at 2006-1-12 00:14:
一般激发波长要比发射波长小5－10nm为宜。有人扫荧光发射时刚好相反，激发选250nm，却从220nm开始扫起，导致仪器总是出错，显示什么overflow。荧光物质的吸收峰和荧光发射峰之间是有些差别的，这个差别叫 stoke s ...

并不是激发波长要比发射波长小多少。当然激发波长肯定是比发射波长小的。
通过荧光物质已知的发射峰，扫描它的激发光谱，可以得到最大激发波长。
然后以它的最大激发波长，扫描它的荧光发射光谱，这样荧光才最强。

Stokes shift 是 激发峰 与 发射峰 之间的距离，即最大激发波长与最大发射波长之间的波长差。Stokes shift 越大，瑞利效应越小。荧光物质的激发峰一般情况下在吸收峰附近。

[ Last edited by soaring0331 on 2006-1-13 at 22:43 ]
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13楼2006-01-13 22:32:15
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soaring0331

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lwx20212 at 2006-1-13 09:21:
在做荧光光谱时，在激发波长和激发波长整数倍的地方都会有瑞利散射，在激发波长几个纳米后还会有一个较弱的拉曼散射峰。判断的方法是改变激发光波长，两个散射峰会随着激发光波长的改变而改变，你真正的荧光峰只会 ...

说的很好，这是所谓的倍频和半频瑞利散射效应。

那个拉曼散射峰是水的拉曼峰

[ Last edited by soaring0331 on 2006-1-13 at 22:48 ]
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14楼2006-01-13 22:47:12
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sangdy

木虫 (著名写手)

对“纠正错误”的错误的纠正

引用回帖:
纠正错误
并不是激发波长要比发射波长小多少。当然激发波长肯定是比发射波长小的。
通过荧光物质已知的发射峰，扫描它的激发光谱，可以得到最大激发波长。
然后以它的最大激发波长，扫描它的荧光发射光谱，这样荧光才最强。

Stokes shift 是 激发峰 与 发射峰 之间的距离，即最大激发波长与最大发射波长之间的波长差。Stokes shift 越大，瑞利效应越小。荧光物质的激发峰一般情况下在吸收峰附近。
[ Last edited by soaring0331 on 2006-1-13 at 22:43 ]

引用回帖:
Originally posted by sangdy at 2006-1-12 00:14:
一般激发波长要比发射波长小5－10nm为宜。有人扫荧光发射时刚好相反，激发选250nm，却从220nm开始扫起，导致仪器总是出错，显示什么overflow。荧光物质的吸收峰和荧光发射峰之间是有些差别的，这个差别叫 stoke s ...  

我这里分明说的是荧光发射的扫描范围，强调的是发射要从比激发波长大5－10nm的波段扫起。需要补充的是扫描范围最大也就是激发波长的二倍足以。个人不认为有什么错误，而且也是对楼主问题的恰当回复。

至于激发波长怎么选，荧光发射波长是多少，上面的“纠正错误”到是存在严重错误，有必要再纠正。

荧光激发波长的选择，原则上说应该以紫外吸收峰为准。即在测荧光之前，须先做一些准备工作。在实际的选择上，在避开各种背景噪音的情况下，宜选取波长较长能量较低的光进行荧光激发。这一点必须着重强调！换句话说，最大激发波长一般是不用的，大多也在205－220nm之间，因为：这个波长的光能量太高，对反射镜（光源后面的那个镜子）和激发光栅、发射光栅以及后面的光电倍增管都是严重的摧残和虐待！

此外还需要强调的是，在测荧光的时候，光源要不停开关的，所以在测的间隙建议随手关灯，以尽可能延长光源的寿命（一般是200－500h）。
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15楼2006-03-03 14:53:32
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sangdy

木虫 (著名写手)
荧光强不一定是好事，我经常为荧光太强，超出测量的极限而头痛，往往意味着必须改光栅狭缝的大小，或者调节入射光的通量。如果是荧光物质本身的荧光效率很低，那根本就不用测荧光，因为影响荧光发射强度的因素太多了，什么都对它造成干扰。另外soaring0331知不知道荧光是没有单位的？它的强度只有相对的意义。
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16楼2006-03-03 15:00:52
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sangdy

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by soaring0331 at 2006-1-13 22:32:
通过荧光物质已知的发射峰，扫描它的激发光谱，可以得到最大激发波长。
然后以它的最大激发波长，扫描它的荧光发射光谱，这样荧光才最强……

至少我是不允许我们实验室的仪器被人这样折磨的，呵呵


[ Last edited by sangdy on 2006-3-3 at 15:11 ]
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17楼2006-03-03 15:02:43
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zwc021

银虫 (小有名气)
我想请问一下，荧光、同步荧光、共振光散射有什么不一样啊 。。。急啊。。
拜托咯！！
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18楼2006-06-06 20:26:36
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gxr1320

金虫 (小有名气)
大家说得真好，我有个问题，我做的样品在紫外灯下照的时候是发红光的，但是用荧光分光光度仪测时，却在523nm处有一个很强的峰，扫描了两次都是这样；
还有我用260nm激发时，扫描时从哪个波段开始呢，我初学光学方面的知识。不太懂，想请大家帮我解答一下。谢谢！
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19楼2006-06-06 21:57:56
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