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止战之殇

铜虫 (小有名气)

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[交流] 跪求，密度梯度离心详细方法再发20G

跪求，密度梯度离心详细方法
我想密度梯度，单细胞微生物。
密度区分下
我这里只有几离心机，高速的低温的
我完全没有用过梯度离心，我们课题组也不会
大哥，大姐，大爷，大妈，弟弟，妹妹，神仙，妖怪
求助啊
再发20个G

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1楼2009-07-13 21:42:56

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shenqicc

金虫 (小有名气)

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性别: GG
专业: 发酵工程

★
止战之殇(金币+1):谢谢参与

百度到的，希望能对你有所帮助！
密度梯度离心
　　又称速率—区带离心,沉降系数较接近的物质分离的方法；
　　原理：不同颗粒之间存在沉降系数差时，在一定离心力作用下，颗粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同区域上形成区带的方法。
　　介质梯度应预先形成，介质的最大密度要小于所有样品颗粒的密度。常用的有蔗糖、甘油；
　　密度梯度液的制备用梯度混合器，形成由管口到管底逐步升高的密度梯度；
　　操作：离心前将样品小心铺放在密度梯度溶液表面，离心形成区带。离心后不同大小、不同形状、有一定沉降系数差异的颗粒在密度梯度液中形成若干条界面清楚的不连续区带；
　　可用来分离核酸、蛋白质、核糖体亚基及其它成分。
　　方法2：
　　纯化病毒常用的方法是蔗糖密度梯度离心法，能得到比较纯的病毒。其过程如下：
　　1、将收集的组织或脏器或其他,用玻璃匀浆器充分研磨后制成悬液,经反复冻融3 次后,置- 20 ℃冰箱中,备用。
　　2、先以5000g离心15分钟后，获取上清夜，然后再20000g高速离心30分钟后取上清夜。
　　3、接着10万g超速离心2h，将沉淀用少量STE溶解。
　　4、先在超速离心管中加入5-8mL的第3步所获取的含病毒样品的溶解液，然后在离心管中依次加入30 % , 45 % , 60 %的蔗糖,加的时候是用长针头从底部往上加的。11万g离心2.5h,发现在30 %与45 % 以及45 % 与60 %之间都有一条明亮的带，用长针头将两条不同部位的带都吸取出来，分别收集到不同的瓶内。
　　5、去蔗糖；用STE缓冲液适量稀释纯化的病毒，然后11万g离心3h,用少量STE（根据沉淀的量决定加入多少）缓冲液把沉淀悬起，即最后获得了纯化的病毒。-20度冻纯备用，用时可用分光光度计测定其病毒含量。