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hyde0706

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+0,VIP+0):欢迎发帖交流! 8-8 20:08
Pcr的退火温度是一个非常重要并且敏感的条件,会与引物浓度有关,离子强度等等。引物合成单上给出的数值一般都不看的,还是自己计算。有很多专业的网站在线计算,比较准确。另外就是需要实验来摸索确定Tm。
11楼2009-08-08 19:38:05
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wulei0708

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
没有研究过,不过我师兄做了梯度PCR相差10度也P出来了
12楼2009-08-09 22:43:09
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greatsun

木虫 (正式写手)

其实,不能直接只看引物的Tm值的。
13楼2009-08-09 23:04:09
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greatsun

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引物的Tm值与实际PCR时的有一定的差距是正常的,我们在进行PCR时,有很多情况也是这样的。
14楼2009-08-09 23:06:42
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wangqk198738

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
老兄,我十分建议你别相信上海生工的话,你得亲自尝试才行,我当时就是这样,吧最初的温度设为55度,而后逐渐降下来,到最后成了43度,有点可怕吧,其实就是这样,甚至于你用公式算出来的都不行,这是唯一可靠的办法,也是保证你实验成功的方法,最重要的是不要换PCR仪,用哪一台就接着用,稍有不慎温度就会变化。切记!
15楼2009-08-10 08:45:06
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gastrodia

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by wangqk198738 at 2009-8-10 08:45:
老兄,我十分建议你别相信上海生工的话,你得亲自尝试才行,我当时就是这样,吧最初的温度设为55度,而后逐渐降下来,到最后成了43度,有点可怕吧,其实就是这样,甚至于你用公式算出来的都不行,这是唯一可靠的办 ...

有道理,我后来解决问题的做法就是自己尝试,通过实验来验证
16楼2009-08-10 10:06:19
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