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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 测序引物Tm的问题
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hyde0706

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+0,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-8 20:08
Pcr的退火温度是一个非常重要并且敏感的条件，会与引物浓度有关，离子强度等等。引物合成单上给出的数值一般都不看的，还是自己计算。有很多专业的网站在线计算，比较准确。另外就是需要实验来摸索确定Tm。
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11楼2009-08-08 19:38:05
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wulei0708

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没有研究过,不过我师兄做了梯度PCR相差10度也P出来了
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12楼2009-08-09 22:43:09
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greatsun

木虫 (正式写手)
其实，不能直接只看引物的Tm值的。
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13楼2009-08-09 23:04:09
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greatsun

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引物的Tm值与实际PCR时的有一定的差距是正常的，我们在进行PCR时，有很多情况也是这样的。
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14楼2009-08-09 23:06:42
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wangqk198738

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
老兄，我十分建议你别相信上海生工的话，你得亲自尝试才行，我当时就是这样，吧最初的温度设为55度，而后逐渐降下来，到最后成了43度，有点可怕吧，其实就是这样，甚至于你用公式算出来的都不行，这是唯一可靠的办法，也是保证你实验成功的方法，最重要的是不要换PCR仪，用哪一台就接着用，稍有不慎温度就会变化。切记！
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15楼2009-08-10 08:45:06
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gastrodia

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wangqk198738 at 2009-8-10 08:45:
老兄，我十分建议你别相信上海生工的话，你得亲自尝试才行，我当时就是这样，吧最初的温度设为55度，而后逐渐降下来，到最后成了43度，有点可怕吧，其实就是这样，甚至于你用公式算出来的都不行，这是唯一可靠的办 ...

有道理，我后来解决问题的做法就是自己尝试，通过实验来验证
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16楼2009-08-10 10:06:19
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