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weiwei1

木虫 (小有名气)

怀疑菌落PCR的准确性
11楼2009-06-22 08:52:11
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longxiange520

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
唉,酶切连接问题确实令人头痛,我做了好久也没有做出来!
12楼2009-06-22 09:31:54
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bbyu007

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用酶切验证!!!!!
我是笨笨鱼~~~
13楼2009-06-22 09:40:42
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~

基因和载体的比例准确吗?尽可能的让片段多一些。
平和悦衲!
14楼2009-06-22 10:40:12
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bclz

铁杆木虫 (正式写手)

是啊,楼主胶回收直接酶切,效率很低,然后再回收,损失很大,所以连接载体基本上是不会成功的。最好就是连T载体,也是很好连啊,然后再提质粒,酶切,再连,应该可以吧
15楼2009-06-22 16:15:42
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wfmgood

银虫 (小有名气)

谢谢,各位网友,根据各位的建议我在试试
16楼2009-07-02 14:05:22
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honghui9251

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
做酶切和连接的时候最好都做一下纯化
有可能是不是酶过期了,或者连接酶不好用
最后不行的话就要测一下引物的序列,看看酶切位点是不是突变了
17楼2009-07-02 20:29:50
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我一般挑40个克隆结果全部是阴性?
双酶切还有阴性?
建议换一下酶或者分别单酶切载体看一下.
18楼2009-07-02 20:45:46
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beisimai895

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我觉的像你这样粘端连问题应该不是很大,因为粘连比较容易,我前段时间做的是平端连接,虽说有点小因困难,但是筛了30株就筛到了二株阳性,关于连接,我觉的二者的比例是最重要的。你要把二者比例弄好,应该没问题的。
19楼2009-07-02 21:56:49
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meng010


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我以前也是被这个问题困扰,一定要每一步都看到结果,特别是酶切一定要看到弥散带 好运啊
20楼2009-07-03 15:00:21
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