酶切连接4个星期一直没成功，求助 - 生物科学 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

11楼2009-06-22 08:52:11

longxiange520

金虫 (小有名气)

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唉，酶切连接问题确实令人头痛，我做了好久也没有做出来！

12楼2009-06-22 09:31:54

bbyu007

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用酶切验证！！！！！

我是笨笨鱼~~~

13楼2009-06-22 09:40:42

haoqian6135

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蜗牛～

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基因和载体的比例准确吗？尽可能的让片段多一些。

平和悦衲！

14楼2009-06-22 10:40:12

bclz

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是啊，楼主胶回收直接酶切，效率很低，然后再回收，损失很大，所以连接载体基本上是不会成功的。最好就是连T载体，也是很好连啊，然后再提质粒，酶切，再连，应该可以吧

15楼2009-06-22 16:15:42

wfmgood

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谢谢，各位网友，根据各位的建议我在试试

16楼2009-07-02 14:05:22

honghui9251

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做酶切和连接的时候最好都做一下纯化
有可能是不是酶过期了，或者连接酶不好用
最后不行的话就要测一下引物的序列，看看酶切位点是不是突变了

17楼2009-07-02 20:29:50

克隆大虾

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我一般挑40个克隆结果全部是阴性?
双酶切还有阴性?
建议换一下酶或者分别单酶切载体看一下.

18楼2009-07-02 20:45:46

beisimai895

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我觉的像你这样粘端连问题应该不是很大，因为粘连比较容易，我前段时间做的是平端连接，虽说有点小因困难，但是筛了30株就筛到了二株阳性，关于连接，我觉的二者的比例是最重要的。你要把二者比例弄好，应该没问题的。

19楼2009-07-02 21:56:49

meng010

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我以前也是被这个问题困扰，一定要每一步都看到结果，特别是酶切一定要看到弥散带好运啊

20楼2009-07-03 15:00:21