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brightfuture01木虫之王 (文坛精英)
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扩增ORF时的引物设计求助
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最近通过文库筛选获得一个包含新基因的序列，测序结果分析得到想要的ORF，设计引物获得ORF全长的时候出现了问题，恳请有经验的兄弟姐妹给予指点哈。 上游引物应该没什么问题： CGG（保护碱基）＋GGTACC（酶切位点）＋ATGAATAATTCAATAACGATTGAT 下游引物设计时头都大了： CCG（保护碱基）＋GAATTC（酶切位点）＋TCAAATAATTGAAGAAAAAATTAC 下游引物里面有连续的6个A，这个在扩增时候会不会出问题啊。而且G+C的含量很低，Tm值不高，错配的可能性比较大。 引物设计在行的高手帮帮忙哈。 |
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