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liu33feng

[交流] 请问过凝胶柱的方法

大家好
我一个植物的正丁醇部分过硅胶柱(150-200目,柱长50cm,内径3.5cm)。流动相用氯仿:甲醇:水梯度洗脱(50:1:0.1     25:1:0.1     ------).  在流动相10:1:0.1   和5:1:0.1下来的组分具有活性。然后点板,层析液为:氯仿:甲醇1:1.   有6个点。

现在想用Sephadex LH一20进一步纯化,不过其分子量不很清楚,不知这样可以吗。另外这个极性应该是中等吧。

呵呵 对这个原理不是很懂,跟着步骤走,初学,希望大家指点下。
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zinedine

新虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
clkk216(金币+1,VIP+0):谢谢参与虫友讨论~! 5-30 21:18
可以用凝胶试一试,甲醇好溶的话就用甲醇洗脱吧
2楼2009-05-30 20:36:15
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liu33feng

用分析纯 甲醇洗脱 应该可以哦
那我看试试
谢谢哦
3楼2009-05-30 21:39:55
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gyp1271985

木虫 (著名写手)

量大的话也可以用硅胶等度洗脱。然后刮板,这样快些
4楼2009-05-31 11:13:00
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hejiangbo

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
凝胶柱 材料sephdex LH-20, 一般装甲醇柱或者氯甲柱(1:1),当然极性更加大的话可以用甲醇水柱,根据极性上柱。凝胶材料比较昂贵,所以上样前保证尽量少的杂质或者固体不容物,必须先过滤,保重材料实用寿命! 上什么样的柱子就用什么样的溶剂溶解过滤为最好!
凝胶柱为分子筛原理,分子量大的先下来!
兜兜转转半生已过
5楼2009-05-31 18:28:21
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独步青云

新虫 (职业作家)

术中小生


karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教! 5-31 23:50
凝胶柱常用的洗脱系统有两种:一是甲醇-水系统(最常用的是纯甲醇),不过偶用过50%的甲醇洗脱极性稍大的化合物,分离效果还不错,我同学还用过纯水直接冲分皂苷,听说效果也很好,不过得是短些的,长的都不流了。这种系统下分离原理就是分子筛和反相结合的;
另外一种就是氯仿:甲醇系统(常用1:1开始),这种是以分子筛为分离原理的。
像你的这个样品,我建议用70%左右的甲醇-水系统来冲下试试看。
6楼2009-05-31 23:31:02
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