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biogefart

木虫 (著名写手)

[交流] 如何提高DNA片段的转化率?

我做的感受态用质粒转化还行,一旦遇到连接片段或者长的DNA片段就很难转化,大家有知道怎么提高的吗?

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-17 at 17:18 ]
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闹太套
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yuweibest

木虫 (正式写手)


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这是菌体的特性!排斥外源基因片段!我也正在做重组菌以及表达这方面,确实小片段容易些,大片段以及需要和受体基因组整合的片段确实很难转化!我也正在摸索提高的方法!个人觉得提高质粒的量会不会好一点!或者干脆用电转算了!
2楼2009-05-26 12:56:56
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haoyou3003

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我觉得可以加大模板浓度,使用电转会好很多
3楼2009-05-26 13:48:36
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

n你说的是细菌还是真菌啊
4楼2009-05-26 16:58:08
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
现在很多公司都有制作感受态细胞的溶液出售,TaKaRa,NEB都有,我试过比自己实验室配置做出来的感受态细胞的转化效率高很多。相同的连接产物,自己做出来的可能只有10个克隆,买的溶液做出来就满满一板
5楼2009-05-26 17:41:55
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rest_cjt

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by haoyou3003 at 2009-5-26 13:48:
我觉得可以加大模板浓度,使用电转会好很多

片段大的话,电转试试吧
6楼2009-06-04 01:21:43
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2008207380

金虫 (小有名气)

片段如果偏大的话,试试电击转化应该会好点吧
7楼2009-06-04 10:10:49
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
另外大肠杆菌的株系也有不同的摄取DNA的能力,DH10B一般用来建BAC库的,可以摄取更大片段的DNA,而DH5-alpha的摄取能力就差远了。如果片段比较大的话可以考虑用DH10B,感受态自己作的就可以,这个感受态买的时候太贵了。电转感受态做法和其他株系差不多,菌浓度到0.76-0.8左右会比菌浓0.4的转化率要高一些。祝好运。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
8楼2009-06-04 10:52:55
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