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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何提高DNA片段的转化率？
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biogefart

木虫 (著名写手)

[交流] 如何提高DNA片段的转化率？

我做的感受态用质粒转化还行，一旦遇到连接片段或者长的DNA片段就很难转化，大家有知道怎么提高的吗？

[ Last edited by 350784478 on 2009-8-17 at 17:18 ]
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闹太套
1楼 2009-05-26 12:18:50
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yuweibest

木虫 (正式写手)
★
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这是菌体的特性！排斥外源基因片段！我也正在做重组菌以及表达这方面，确实小片段容易些，大片段以及需要和受体基因组整合的片段确实很难转化！我也正在摸索提高的方法！个人觉得提高质粒的量会不会好一点！或者干脆用电转算了！
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2楼2009-05-26 12:56:56
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haoyou3003

新虫 (初入文坛)
★
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我觉得可以加大模板浓度，使用电转会好很多
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3楼2009-05-26 13:48:36
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
n你说的是细菌还是真菌啊
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4楼2009-05-26 16:58:08
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charlies929

至尊木虫 (正式写手)
★
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现在很多公司都有制作感受态细胞的溶液出售，TaKaRa，NEB都有，我试过比自己实验室配置做出来的感受态细胞的转化效率高很多。相同的连接产物，自己做出来的可能只有10个克隆，买的溶液做出来就满满一板
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5楼2009-05-26 17:41:55
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rest_cjt

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by haoyou3003 at 2009-5-26 13:48:
我觉得可以加大模板浓度，使用电转会好很多

片段大的话，电转试试吧
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6楼2009-06-04 01:21:43
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2008207380

金虫 (小有名气)
片段如果偏大的话，试试电击转化应该会好点吧
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7楼2009-06-04 10:10:49
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
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另外大肠杆菌的株系也有不同的摄取DNA的能力，DH10B一般用来建BAC库的，可以摄取更大片段的DNA，而DH5－alpha的摄取能力就差远了。如果片段比较大的话可以考虑用DH10B，感受态自己作的就可以，这个感受态买的时候太贵了。电转感受态做法和其他株系差不多，菌浓度到0.76－0.8左右会比菌浓0.4的转化率要高一些。祝好运。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
8楼2009-06-04 10:52:55
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