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bluesky3858

银虫 (小有名气)

[交流] 请教镍柱纯化蛋白中出现的问题

各位战友,这两天在做原核表达时遇到了一个问题:
表达产物(菌体超声破碎后的上清液)利用镍柱亲和层析后,纯化的蛋白产物在用Xa因子酶切时出现怪异现象:一加CaCl2就有白色沉淀析出
这是怎么回事啊?还望各位帮我解答一下,多谢啦!
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jin56419303

木虫 (小有名气)

Ca 2+不能和磷酸盐共用,2mM的Ca2+就会产生磷酸钙沉淀,用Hepes或Tris配制缓冲液吧
13楼2009-06-04 15:32:02
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bluesky3858

银虫 (小有名气)

我洗脱用的磷酸盐缓冲液,要是用tris-hcl是不是会好点啊?
默默的努力!永远的开心!
4楼2009-05-25 18:30:47
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)



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磷酸缓冲液能够洗脱?

蛋白要脱盐,还要保存在适当的缓冲液,要不就说不清了。。。
6楼2009-05-26 07:35:15
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DLLB

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我实验室用的Tris-Hcl缓冲液洗脱
7楼2009-05-26 13:41:13
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