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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教镍柱纯化蛋白中出现的问题
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bluesky3858

银虫 (小有名气)

[交流] 请教镍柱纯化蛋白中出现的问题

各位战友，这两天在做原核表达时遇到了一个问题：
表达产物（菌体超声破碎后的上清液）利用镍柱亲和层析后，纯化的蛋白产物在用Xa因子酶切时出现怪异现象：一加CaCl2就有白色沉淀析出
这是怎么回事啊？还望各位帮我解答一下，多谢啦！
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默默的努力!永远的开心!
1楼 2009-05-25 13:29:37
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jin56419303

木虫 (小有名气)
Ca 2+不能和磷酸盐共用，2mM的Ca2+就会产生磷酸钙沉淀,用Hepes或Tris配制缓冲液吧
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13楼2009-06-04 15:32:02
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bluesky3858

银虫 (小有名气)
我洗脱用的磷酸盐缓冲液，要是用tris-hcl是不是会好点啊？
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默默的努力!永远的开心!
4楼2009-05-25 18:30:47
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
★
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磷酸缓冲液能够洗脱？

蛋白要脱盐，还要保存在适当的缓冲液，要不就说不清了。。。
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6楼2009-05-26 07:35:15
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DLLB

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我实验室用的Tris-Hcl缓冲液洗脱
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7楼2009-05-26 13:41:13
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