应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 重组质粒这样正常吗？急！!
111/2返回列表12下一页
查看: 400  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

沧海蝴蝶

[交流] 重组质粒这样正常吗？急！!

PCR产物（1kb）连到PMD18-T（2.7kb）上，蓝白斑筛选。挑了6个白色菌落，提了一下质粒。第二个孔是PMD18-T质粒，重组质粒怎么变小了？正常吗？是不是没连上？很着急。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-05-24 18:20:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):鼓励~ 5-25 12:53
T载体是开环的，跑得慢是正常的。
第6孔估计是载体自连
其它可能是阳性克隆
赞一下(10人) 回复此楼
2楼2009-05-24 18:42:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论 5-25 12:54
引用回帖:
Originally posted by 沧海蝴蝶 at 2009-5-24 18:20:
PCR产物（1kb）连到PMD18-T（2.7kb）上，蓝白斑筛选。挑了6个白色菌落，提了一下质粒。第二个孔是PMD18-T质粒，重组质粒怎么变小了？正常吗？是不是没连上？很着急。

第二个空是空载体？
有没有弄错上样顺序？酶切下看看有没有
赞一下(10人) 回复此楼
3楼2009-05-24 18:44:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沧海蝴蝶

谢谢二位。没有弄错上样顺序，也切了，可切不开，所以觉得很可疑。
50μl酶切体系：
XhoⅠ                  1.5μl
NdeⅠ                  1.5μl
重组质粒              1μl
10×H Buffer          5μl
灭菌ddH2O           补足50μl
37℃过夜
赞一下 回复此楼
4楼2009-05-24 20:28:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w.king124

金虫 (正式写手)
质粒怎么是两条带呢？图上是酶切过得吗
赞一下 回复此楼
5楼2009-05-25 11:48:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seven5650

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
切不开也可能是你酶的问题呢。做单酶切对照没？
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2009-05-25 13:25:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沧海蝴蝶

没做单酶切对照，上面的电泳图都是重组质粒，没有切。现附上酶切过的图，好像是没切开，第二个孔是重组质粒，三四孔是双酶切过的。
赞一下 回复此楼
7楼2009-05-25 19:47:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charlies929

至尊木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1. 酶切体系中质粒只加1ul太少了吧
2. 抽提出的质粒由于存在3种构象DNA电泳中大小有差异很正常。
3. 单酶切下后就可以看出实际大小了
4. 建议双酶切鉴定和质粒PCR鉴定
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2009-05-26 17:09:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)
像是切开了啊
回复此楼
9楼2009-05-26 18:30:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqq1985

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你没有做酶切吧，环状质粒比线性的Marker跑得快是正常的。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2009-05-26 19:15:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 沧海蝴蝶 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭