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人脐带间充质干细胞，hUC-MSC已有3人参与
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人脐带间充质干细胞，hUC-MSC Human umbilical cord mesenchymal stem cell 货号：CW-C001 规格：1×10^6个细胞/管，P2 产品介绍 间充质干细胞是一种具有自我复制能力和多向分化潜能的成体干细胞，广泛存在于全身多种组织中，可在体外培养扩增，在特定条件下可分化为包括脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞等的细胞。 脐带间充质干细胞提来源于健康足月分娩的新生儿脐带，通过组织爬块或酶消化法获得，拥有强大的增殖及多向分化的能力。 来源 健康产妇/新生儿脐带 细胞类型 贴壁、呈梭形 培养液 α-MEM，10% FBS，2mM L-glutamine, 1% 双抗 生长条件 5% CO2，37℃ 冻存液 70% α-MEM，20% FBS，10% DMSO 质量控制 细菌、真菌、内毒素、支原体阴性； CD73,CD105,CD90表达阳性；CD14,CD19,CD34,CD45,HLA-DR表达阴性； 具备分化成脂肪、成骨、成软骨等细胞的能力。 本产品仅供科研使用，不可应用于临床治疗等其他方面。 产品自收到之日起在-135℃或更低温度下可至少保存12个月；在-80℃可短期存储4周。为保证产品质量，我们不建议客户将细胞产品存储于-80℃。 产品自收到后，请在无菌条件下并参照“复苏和培养”操作说明，进行细胞的处理 我们建议客户根据实际情况，存储一部分细胞作为备份。 我们建议细胞的接种密度为2-5×10^4/cm2，细胞至少可传12代。 由于各实验室培养体系或操作方法的不同，我们不能保证细胞在客户实验室的所有生物学功能。 人脐带间充质干细胞的复苏和培养 重要提示：为保证细胞质量，请解冻后（洗涤前）立即进行细胞计数。解冻后的细胞，在无菌条件下，立即置于预热的细胞培养液中，按操作说明处理细胞。 1. 水浴锅升温至37℃。 2. 准备好9mL细胞培养液于15mL无菌离心管中，置于37℃水浴锅预热。 3. 将冻存管从液氮中取出，置于转移容器中。 提示：为了使用安全，可将冻存管放置于干冰上转移；或将冻存管拧松1/4圈，释放内部压力后再拧紧。 4. 冻存管在37℃水浴锅内不断摇动，至内容物融化。请仔细观察，待冻存管内容物呈半融状态，即刻从水浴锅内取出冻存管。 提示：尽量避免水没过冻存管盖；融化的时候越短，对细胞的损伤越小。 5. 用75%酒精消毒冻存管口及外壁，擦拭干净。 6. 在无菌工作台内打开冻存管，用1mL移液器轻轻吹匀融化的细胞悬液，取20μL细胞悬液用于计数。 7. 其余的细胞悬液全部转入步骤⑵预热的15mL离心管中，轻轻混匀。（为了减少损失的细胞数量，可以用1mL完全培养液，冲洗冻存管，再将1mL涤洗液加入离心管）。 8. 将离心管拧紧，放入离心机内。离心机设置离心速度为300g，离心10分钟。 9. 离心结束后，无菌工作台内打开离心管，用移液器尽量去除上清液，向下层沉淀物中加入1mL预热的完全培养液，轻轻吹匀。 提示：请尽量减少吹打的次数，一般3-4次即可。吹打过程中，避免气泡的产生。 10. 将细胞全部接种到1个100mm培养皿或T25细胞培养瓶中，加入足量的完全培养液，轻轻摇晃、混匀，使细胞均匀分布。 11. 将细胞培养容器转入5%CO2，37%，饱和湿度的培养箱中培养。 12. 通常培养6-8小时，细胞开始贴壁。 13. 复苏后的第2天，显微镜下观察细胞，细胞基本全部贴壁。 14. 在无菌工作台内，用移液器弃去培养容器内的培养液，更换为新鲜、37℃预热的完全细胞培养液。 15. 培养48-72小时后，细胞融合率达80%，可进行消化和传代。 人脐带间充质干细胞的传代 1. 准备适量的细胞培养液、1×PBS磷酸盐缓冲液（pH=7.2）、0.25%胰酶-EDTA预热至37℃。 2. 无菌工作台内，弃去原培养容器内的培养液。 3. 取5mL PBS缓冲液加入100mm细胞皿中（T25培养瓶加入3mL），轻轻涤洗细胞表面，再用移液器弃去PBS。此步骤重复2次。 4. 向细胞平皿中加入2mL胰酶（T25加入1mL），轻轻晃动平皿，使胰酶充分覆盖细胞表面。将平皿转移至细胞培养箱，孵育2分钟左右。 5. 显微镜下观察，大部分细胞呈圆形、透亮，并从平皿上脱落。 6. 向平皿中加入10mL细胞培养液（胰酶与培养液体积比为1：5）终止消化。 7. 用移液管吹打培养皿底面，使细胞全部从皿底脱落。吹打3-4遍即可，尽量避免气泡的产生。 8. 将细胞悬液全部转入15mL离心管中。 9. 将离心机设置离心速度为300g，离心10分钟。 10. 离心结束后，弃去上清液，向下层沉淀加入1mL细胞培养液，轻轻吹散、吹匀。 11. 将细胞密度用细胞培养液稀释至2-5×10^4/cm2传代。 12. 将细胞培养容器放入5%CO2，37%，饱和湿度的培养箱中培养。  脐带血间充质干细胞.jpg |
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