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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助关于基于pET28a的蛋白表达
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

[交流] 求助关于基于pET28a的蛋白表达

目的蛋白只有16kD，用的是BamHI和HindIII的酶切位点，目的片段不含起始密码子但有终止密码子。然而诱导后却在35kD左右有一明显条带，16kD左右无条带。不知怎么回事？
还有就是pET28a中的起始密码子是NcoI的ATG还是NdeI的ATG？
求高手指教
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1楼 2009-05-12 23:00:46
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GinTonic

金虫 (小有名气)
楼主 我的是两端都有his-tag的，我的蛋白理论值在12kd左右，表达后在17kd左右，大于17kd，建议你做个western吧验证下。
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7楼2009-05-13 12:04:38
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lifefamily

起点肯定是NcoI呐，pET28a的特点就是N端带有His-tag
楼主，手里拿一份质粒图谱一看，不就很清楚了么？
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2楼2009-05-13 10:04:29
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lifefamily

另，由于两段都带有His-tag，还有thrombin位点什么的，表达出的蛋白全长应该会多出几k，就不是16k了
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3楼2009-05-13 10:10:38
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)
可也不至于多出一倍多啊？
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4楼2009-05-13 10:21:14
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