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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

[交流] 求助关于基于pET28a的蛋白表达

目的蛋白只有16kD,用的是BamHI和HindIII的酶切位点,目的片段不含起始密码子但有终止密码子。然而诱导后却在35kD左右有一明显条带,16kD左右无条带。不知怎么回事?
还有就是pET28a中的起始密码子是NcoI的ATG还是NdeI的ATG?
求高手指教
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lifefamily


xuehu2008(金币+1,VIP+0):谢谢 5-14 23:22
不是啊~~
他做蛋白表达纯化的,表达出来自然是要过Ni柱的吧?实验室里肯定是有装好的Ni柱的,直接用就是了,半天搞定。
做个western不得花一天啊……
10楼2009-05-13 15:02:59
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lifefamily

起点肯定是NcoI呐,pET28a的特点就是N端带有His-tag
楼主,手里拿一份质粒图谱一看,不就很清楚了么?
2楼2009-05-13 10:04:29
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lifefamily

另,由于两段都带有His-tag,还有thrombin位点什么的,表达出的蛋白全长应该会多出几k,就不是16k了
3楼2009-05-13 10:10:38
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

可也不至于多出一倍多啊?
4楼2009-05-13 10:21:14
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