24小时热门版块排行榜    

查看: 1313  |  回复: 13
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

spiderboy

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】关于感受态细胞的制备及转化,急助

各位虫友帮忙来看看,我们都急死了。
    最近做了3次感受态细胞,但是每一次用PUC19转化,平板上居然连一个转化子都没有,次次都是这样。
    请问下42摄氏度的热激真有那么关键吗?因为我们的水浴锅实际温度可能只有41度。
    还有,除了这个可能原因之外,我们排除了试剂和其他操作的原因,会不会有可能是菌种出了问题?
    各位有啥经验,能否提供些信息?若这个问题解决了,必有重金酬谢!!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifefamily

还是严格按照protocol来操作吧~~
我有时候也是偷懒,没有全程冰浴啊,或者热激过久啊什么……
8楼2009-05-13 10:51:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

mimisikai

金虫 (小有名气)

★ ★
spiderboy(金币+2,VIP+0):谢谢 5-12 21:54
41度和42度相差不大 我用52度还成功转化过

问题在你的感受态 试剂很重要 要保证一定的纯度 尤其是氯化钙 也可以尝试加点氯化镁

全程保持低温更是关键

我做出来的感受态用一年也很好
2楼2009-05-12 21:18:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spiderboy

金虫 (正式写手)

回楼上的,我们试剂应该是没问题的,因为第一次做的时候,现像是正常的,但是第二次做的时候就转不出来了,百思不得其解,不清楚原因在哪里
3楼2009-05-12 21:35:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taizf

金虫 (小有名气)


spiderboy(金币+1,VIP+0):谢谢 5-12 22:33
一点经验:关键是全程冰浴和密度合适。完成后放入4摄氏度过夜,第二天加15%甘油液氮速冻,-70保存。
4楼2009-05-12 21:46:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +37 医学老男孩 2026-08-13 87/4350 2026-08-18 06:35 by 医学老男孩
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
请填处理意见