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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 实验技术 » 关于植物蔗糖合成酶与磷酸蔗糖合成酶问题
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疯狂的熊猫

新虫 (正式写手)
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关于植物蔗糖合成酶与磷酸蔗糖合成酶问题
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SS和SPS经本人几次重复试验未做出结果，主要是间苯二酚法加2M后沸水浴溶液变黄，我查了下可能是蔗糖的非酶褐变，也就是蔗糖的焦糖化反应，导致最后溶液不显色。目前本人有个思路，测酶时，调节反应介质ph7.0, 一个酶做两管，一管做参比先沸水浴3分钟杀酶，另一管测定，在反应时间结束后沸水浴3分钟终止反应，之后均测反应液的葡萄糖含量，用葡萄糖氧化酶法测定，参比吸光值-测定管即为蔗糖消耗量，根据葡萄糖标曲查值。还有葡萄糖含量的测定用到葡萄糖氧化酶法的话最好不要用到邻联茴香胺或者其盐酸盐，前者不容于水，后者虽然溶于水，但是它的溶解度跟溶液ph值相关，本评亲测其盐酸盐在ph3.3~3.5或者更低的ph值才不会有沉淀产生！

补充一哈，考虑到终止反应时沸水浴多多少少会引起生成蔗糖的水解，终止温度的话换成70？或者80℃？然后迅速流水冷却

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1楼2019-02-01 18:37:00
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