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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 生物学培养基-----大家讲
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c3024034

银虫 (正式写手)
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amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 5-28 13:17
培养基（Medium）是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素。
按所用原料不同，可分为两类：应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的，称为天然培养基；应用化学药品配成并标明成分的，称为合成培养基或综合培养基。化学试剂中的培养基，大多为合成培养基。由于液体培养基不易长期保管，现在均改制成粉末。培养基由于配制的原料不同，使用要求不同，而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在受热、吸潮后，易被细菌污染或分解变质，因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培养基（如组织培养基），较长时间的贮存，必须放在2~6。C的冰箱内。
常见培养基有：

1、细菌培养基

配方一 牛肉膏琼脂培养基
牛肉膏0.3克 ，蛋白胨1.0克，氯化钠 0.5克，琼脂 1.5克，
水 100毫升

在烧杯内加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2～7.6,分装在各个试管里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌30分钟。

配方二 马铃薯培养基

取新鲜牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀细细剁成肉末后，加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号，煮沸，转用文火炖2小时。过滤，滤出的肉末干燥处理，滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心，灭菌，备用。

配方三 根瘤菌培养基

葡萄糖 10克 磷酸氢二钾 0.5克
碳酸钙 3克 硫酸镁 0.2克
酵母粉 0.4克 琼脂 20克
水 1000毫升 1%结晶紫溶液 1毫升

先把琼脂加水煮沸溶解，然后分别加入其他组分，搅拌使溶解后，分装，灭菌，备用。

2、放线菌培养基

配方一 淀粉琼脂培养基（高氏培养基）

可溶性淀粉 2克 硝酸钾 0.1克
磷酸氢二钾 0.05克 氯化钠 0.05克
硫酸镁 0.05克 硫酸亚铁 0.001克
琼脂 2克 水 100毫升
先把淀粉放在烧杯里，用5毫升水调成糊状后，倒入95毫升水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整pH值到7.2～7.4，分装后灭菌，备用。

配方二 面粉琼脂培养基

面粉 60克 琼脂 20克
水 1000毫升
把面粉用水调成糊状，加水到500毫升，放在文火上煮30分钟。另取500毫升水，放入琼脂，加热煮沸到溶解后，把两液调匀，补充水分，调整pH值到7.4，分装，灭菌，备用。

3、真菌培养基

配方一 萨市（Sabouraud’s）培养基

蛋白胨 10克 琼脂 20克
麦芽糖 40克 水 1000毫升

先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。

本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。

配方二 马铃薯糖琼脂培养基

把马铃薯洗净去皮，取200克切成小块，加水1000毫升，煮沸半小时后，补足水分。在滤液中加入10克琼脂，煮沸溶解后加糖20克（用于培养霉菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖），补足水分，分装，灭菌，备用。

把这培养基的pH值调到7.2～7.4，配方中的糖，如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。

配方三 黄豆芽汁培养基

黄豆芽 100克 琼脂 15克
葡萄糖 20克 水 1000毫升

洗净黄豆芽，加水煮沸30分钟。用纱布过滤，滤液中加入琼脂，加热溶解后放入糖，搅拌使它溶解，补足水分到1000毫升，分装，灭菌，备用。

把这培养基的pH值调到7.2～7.4，可用来培养细菌和放线菌。

配方四 豌豆琼脂培养基

豌豆 80粒 琼脂 5克
水 200毫升

取80粒干豌豆加水，煮沸1小时，用纱布过滤后，在滤液中加入琼脂，煮沸到溶解，分装，灭菌，备用。

4、食用菌菌种培养基

配方一 马铃薯—蔗糖--琼脂培养基

20%马铃薯煮汁 1000毫升
蔗糖 20克 琼脂 18克

把马铃薯洗净去皮后，切成小块。称取马铃薯小块200克，加水1000毫升，煮沸20分钟后，过滤。在滤汁中补足水分到1000毫升，即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖，煮沸，使它溶解后，补足水分，分装，灭菌，备用。使用该培养基对pH值要求不严格，可以不测定。

配方二 综合马铃薯培养基

20%马铃薯煮汁 1000 毫升

磷酸二氢钾 3克 硫酸镁 1.5克
葡萄糖 20克 维生素 10毫克
琼脂 18克

先配制20%马铃薯煮汁，方法同上。在煮汁中加入上述各种组分，加热溶解后补足水分，调整pH值到6。分装，灭菌，备用。 该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。

5.烟草的培养基
在植物组织培养时,通过调节IAA和CTK的比值能影响愈伤组织分化出根或芽.CTK/IAA高时,愈伤组织分化芽
CTK/IAA低时,分化根;CTK/IAA比例适中维持愈伤组织不分化

愈伤组织诱导培养基制备
以MS培养基母液为基础,向洁净铝锅中顺序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,铁盐100×母液20mL ,维生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配制得MS培养基后,再加入0.5mg·L-1的BA8mL,0.5mg·L-1的NAA8mL.然后加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水,加入40g蔗糖后搅拌使其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl调整pH值至5.8-6.0.加入14g琼脂,将铝锅置于电炉上,搅拌加热使琼脂完全溶化,然后用蒸馏水定容至终体积2L,继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中.

烟草叶片愈伤组织诱导
取一无菌培养皿,用解剖刀切取1-2片无菌苗叶片置于无菌培养皿中,并用解
剖刀将叶片切成2mm2左右的小片,然后将其接种于准备好的培养基上,每瓶接种
5小片,一共接种6瓶.接种后的三角平置于24条件下黑暗培养1周,然后在同
样温度下有光照和全黑暗下培养3周直至愈伤组织形成(两种情况各置3瓶).观
察愈伤组织诱导结果,统计愈伤组织诱导率.

器官分化及植株再生培养
将诱导的愈伤组织按类型分别转入分化培养基上,置于连续光照,温度20-22 C条件下培养3周,统计愈伤组织再生植株情况.

愈伤组织诱导的总体情况
烟草愈伤组织诱导培养4周后,愈伤组织基本形成,即排除因生长时间不够而
未形成愈伤的情况.具体情况见表一中所示,6瓶培养物均有愈伤形成,且都未发
生污染,但诱导率几乎各不相同.其中, 在光照条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为
60.0℅, 在黑暗条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为46.7%.由于实验过程中,外植
体即烟草叶片取得偏小,接种时可能已有部分外植体的大部分细胞脱水死亡,使整
个实验的愈伤组织诱导率偏低,愈伤块偏小.


特殊培养基：

一 选择性培养基
1酵母菌富集培养基
葡萄糖5% 尿素0.1% 硫化铵0.1% 磷酸二氢钾0.25% 磷酸氢二钠0.05% 七水合硫酸镁0.1% 七水合硫酸铁0.01% 酵母膏0.05%
孟加拉红0.003% pH4.5
2 Ashby无氮培养基 富集好养自生固氮菌
甘露醇1% 磷酸二氢钾0.02% 七水合硫酸镁0.02% 氯化钠0.02%
二水合硫酸钙0.01% 碳酸钙0.5%

二 鉴别培养基
EMB培养基，常用于鉴别E.coli
蛋白胨 10g 乳糖5g 蔗糖5g 磷酸氢二钾2g 伊红Y 0.4g 美蓝0.065g
蒸馏水1000g pH7.2

分离海洋微生物的培养基配方

2216E培养基配方（固体培养基）
蛋白胨 5克
酵母膏 1克
磷酸高铁 0.01克
琼脂 15-20克
陈海水 1000毫升
煮沸氢氧化纳（5%）的溶液调PH值7.6—7.8
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21楼2009-05-21 12:21:45
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野蜂飞舞

我们组培养内生蓝藻用的是BBM培养基，这种培养基主要培养绿藻用，对于蓝藻，营养成分过于丰富，蓝藻生长太旺盛。后来我们把N、P减少至1/10，效果比较好
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22楼2009-05-21 18:24:58
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seapine

金虫 (正式写手)
★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 5-28 13:17
培养基产品分为细胞培养基、平衡盐、细菌培养基产品。
平衡盐（balanced salt solution，BSS）
常用的平衡盐有：
1．  Dulbecco,s平衡盐（D-PBS），2．  不3．  含碳酸氢钠；
4．  Hanks,平衡盐（HBSS），5．  含碳酸氢钠少，6．  约0.35mg/L；
7．  Earle,s平衡盐（EBSS），8．  含碳酸氢钠多，9．  约2.2mg/L；
10．  PBS平衡盐，11．  无Ca2+、Mg2+离子。
传统基础细胞培养基及其改良培养基
基础细胞培养基通常指基础合成培养基，主要成分为氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐、辅助物质（核酸降解物、氧化还原剂等）。
BME细胞培养基
基础Eagle培养基（Basal Medium Eagle），1955年由Eagle设计，BSS＋12种氨基酸＋谷氨酰胺＋8种维生素。简单、便于添加，适于各种传代细胞系和特殊研究用，在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMDM等。
MEM细胞培养基
低限量Eagle培养基（Minimal Essential Medium），1959年修改配方，删去赖氨酸、生物素，增加氨基酸浓度，适合多种细胞单层生长，是一种最基本、适用范围最广的培养基，是一种被广泛应用的培养基。
DMEM细胞培养基及其改良品种
培养基  DMEM（HED）细胞培养基  DMEM细胞培养基   
30次收液中平均HBsAg含量  3.75μg/ml  3.51μg/ml   

IMDM细胞培养基
IMDM是由Iscove's改良的Eagle培养基，增加了几种氨基酸和胱氨酸量。可用于杂交瘤细胞培养，以及无血清培养的基础培养基。
RPMI-1640细胞培养基
Fischer’s细胞培养基
用于白血病微粒细胞培养。
HamF10、F12细胞培养基
1963年、1969年由Ham设计，含微量元素，可在血清含量低时用，适用于克隆化培养。F10适用于仓鼠、人二倍体细胞，F12适用于CHO细胞。
DMEM/F12细胞培养基
低血清细胞培养基
血清对于在传统培养基配方中生长和增殖的大多数细胞系来说是必不可少的。大部分的组织培养研究者非常熟悉血清添加物给予基本培养基配方的良好生长支持特征。然而，伴随血清的使用也带来了很多的问题。
费用因素
通l  
细菌培养基
细菌培养基为肺炎、流脑等细菌培养疫苗生产专用培养基。用于细菌性疫苗大规模生产中细菌体的培养及实验室中细菌体的研究培养。
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23楼2009-05-23 17:22:12
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songyao927

新虫 (初入文坛)
培养基各种资料上都有，但可以根据自己的目的，培养的菌种，自己设计一定的培养基！~
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24楼2009-05-24 00:40:09
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taiyang1983

铁虫 (初入文坛)

培养基问题

如果培养基中2个成分，一起灭菌会产生沉淀，是否需要分开灭菌，然后冷却后混合。
磷酸氢二钾作为培养基成分除了提供P元素和调节pH的作用，还有别的作用吗？有没有别的不含磷酸根离子的无机化合物代替呢？
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25楼2009-05-24 17:58:46
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huayingxin

木虫 (著名写手)

虫之圣者
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pda培养基。我最常用的。
主要用于培养真菌，
PDA
200克马铃薯25分钟煮熟过滤取滤液
15——18克琼脂
17——20克蔗糖
加水补满到1000ml
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无端更渡桑乾水,却望并州是故乡
26楼2009-05-26 11:03:00
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gechunhui

铜虫 (正式写手)
★
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 5-28 13:18
植物培养基的配置
实验中，植物根诱导培养基为MS，芽诱导培养基为MS4。
植物培养基贮液配制一览表
贮液        成分        使用量（200ml）
Stock 1        NH4NO3        33g
        KNO3        38g
Stock 2        MgSO4.7H2O        7.4g
        KH2PO4        3.4g
Stock 3        CaCl2.2H2O        8.8g
Stock 4        Na2.EDTA        0.746g
        FeSO4.7H2O        0.556g
Stock 5        H3BO4        0.124g
        MnSO4.4H2O        0.446g
        ZnSO4.4H2O        0.172g
        KI        0.017g
        Na2MoO4.2H2O        0.005g
        CuSO4.2H2O        0.5mg
        CoCl2.6H2O        0.5mg
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27楼2009-05-28 11:56:33
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amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我来说说我的促芽孢培养基
牛肉膏12g；氯化钠5g；水 1000ml；MnSO4 0.5g；pH7.0-7.2,能够最大限度的促进枯草芽孢杆菌产芽孢。
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如果没有人帮助你，那么你就去帮助别人。
28楼2009-05-28 23:15:49
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liziyoun

银虫 (正式写手)
PDA培养基
  去皮土豆200g
    葡萄糖15-20g
    琼脂粉15-20g
土豆切碎纱布包裹后煮沸，取土豆液配制成1000ml
（不加琼脂粉就是PDB培养基了）
   分装后灭菌就OK

很多菌都爱吃，呵呵

[ Last edited by liziyoun on 2009-5-31 at 20:03 ]
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29楼2009-05-31 19:59:32
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changle9139

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主优秀版主

太全了

引用回帖:
Originally posted by 圆头 at 2009-4-27 15:30:
培养基解释和常见问题(细胞培养)

无血清培养基：Serum free medium，SFM。基本成份是：基础培养基+添加组份。
添加组份可能包括：纤粘蛋白、层粘连蛋白等壁因子、胰岛素、转铁蛋白、
硒等。

无血清无动物 ...

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没个性不敢签名！
30楼2009-06-01 17:04:45
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