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dapaosheng

木虫 (著名写手)

应助: 0 (幼儿园)
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帖子: 1088
在线: 222.2小时
虫号: 613855
注册: 2008-09-27
专业: 色谱分析

[交流] 实验求助

有没有人做过毕亦酵母的表达，我插入的外源基因在培养基上清中没有表达，是什么原因呢，应该怎样解决呢？

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1楼 2009-04-24 00:07:35

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

2004371310

木虫 (著名写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 9194
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红花: 1
帖子: 2157
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虫号: 596733
注册: 2008-09-09
专业: 食品科学基础

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
dapaosheng(金币+8,VIP+0):谢谢你的建议，挺详细的，我会好好试一下的 4-24 12:55

你首先要确定你用的载体有没有问题，如果没有问题的话，你就要看一下你插入的片段有没有改变载体原有的阅读框，如果这些都没有问题的话，那可能是你的培养条件和诱导条件没有摸好吧，或者你也可以试一下换一种酶来做线性化，然后再转化一次，这可能也是有一点影响的，其实上清中没有表达也不是什么奇怪的事，因为也有可能跟你插入的片段的大小和碱基组成有关的，你也可以试一下把酵母破碎了，然后跑一下SDS-PAGE看有没有你的目的蛋白，如果有的话就说明是有表达的，只是不能分泌到上清而已